砀山酥梨果实PPO克隆、正反义表达载体构建及原核表达
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-14页 |
| ·国内外研究动态 | 第9-13页 |
| ·多酚氧化酶基因分子结构特征 | 第9-10页 |
| ·多酚氧化酶克隆研究进展 | 第10-11页 |
| ·多酚氧化酶原核表达的研究进展 | 第11页 |
| ·多酚氧化酶的时空表达特异性研究 | 第11-12页 |
| ·多酚氧化酶遗传转化与功能研究进展 | 第12-13页 |
| ·研究意义 | 第13-14页 |
| 2 引言 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-30页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·实验设计与技术路线 | 第16-17页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·测定项目及方法 | 第18-30页 |
| ·砀山酥梨果实总RNA提取 | 第18页 |
| ·RNA质量检测 | 第18页 |
| ·cDNA链的合成 | 第18-19页 |
| ·砀山酥果实PPO的PCR扩增 | 第19-20页 |
| ·PCR产物的纯化与回收 | 第20页 |
| ·PPO目的片段与pMD-19T克隆载体连接 | 第20页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态制备 | 第20页 |
| ·连接产物的转化 | 第20-21页 |
| ·重组质粒pMD19T-PPO鉴定 | 第21-22页 |
| ·PPO的生物信息学分析 | 第22-23页 |
| ·PPO正反义表达载体的构建 | 第23-25页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| ·PPO基因的原核表达 | 第27-28页 |
| ·PPO在果实中不同时期表达 | 第28-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-46页 |
| ·提取的砀山酥梨果实总RNA | 第30页 |
| ·PPO1与PPO2 PCR扩增与TA克隆 | 第30-33页 |
| ·PPO基因序列分析 | 第33-37页 |
| ·PPO正、反义表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·PPO原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·PPO原核表达 | 第40-43页 |
| ·PPO在BL21表达菌株中表达 | 第40-41页 |
| ·PPO在Rosetta表达菌株中表达 | 第41页 |
| ·PPO在Rosetta表达菌株中表达条件的优化 | 第41-43页 |
| ·PPO在果实中不同时期表达 | 第43-46页 |
| ·实时荧光定量PCR条件优化 | 第43-44页 |
| ·不同时期果实中PPO表达量变化 | 第44-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| ·PPO生物信息学分析 | 第46页 |
| ·PPO正反义表达载体的构建 | 第46页 |
| ·PPO原核表达 | 第46-49页 |
| 6 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录1 缩略语表 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
| 在读期间发表的论文 | 第57页 |
