| 缩略词表 | 第1-13页 |
| 中文摘要 | 第13-16页 |
| 英文摘要 | 第16-19页 |
| 第一章 前言 | 第19-30页 |
| ·促红细胞生成素 | 第19-22页 |
| ·促红细胞生成素的功能与用途 | 第19-21页 |
| ·促红细胞生成素的研究概况 | 第21-22页 |
| ·适配体及SELEX筛选技术 | 第22-27页 |
| ·适配体 | 第22-23页 |
| ·SELEX技术 | 第23-27页 |
| ·分子信标的原理及设计策略 | 第27-28页 |
| ·本论文的研究思路与创新点 | 第28-30页 |
| 第二章 rHuEPO-α的特异性寡核苷酸适配体的SELEX筛选 | 第30-58页 |
| ·引言 | 第30-31页 |
| ·仪器与试剂 | 第31-33页 |
| ·仪器设备 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31-32页 |
| ·主要溶液配制 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·SDS-PAGE方法鉴定rHuEPO-α纯度 | 第33-34页 |
| ·电泳迁移率变动分析(EMSA) | 第34页 |
| ·文库PCR扩增条件的优化 | 第34-35页 |
| ·dsDNA-磁珠提取纯化法制备ssDNA文库 | 第35-36页 |
| ·γ-~(32)P标记寡核苷酸文库 | 第36页 |
| ·凝集素-亲和树脂SELEX筛选 | 第36-38页 |
| ·不同轮数富集文库及适配体与靶蛋白结合率测定 | 第38页 |
| ·EMSA测定不同轮数富集文库与rHuEPO-α间的亲和力 | 第38页 |
| ·适配体的克隆、测序 | 第38-39页 |
| ·适配体序列分析 | 第39页 |
| ·适配体与促红细胞生成素rHuEPO-α间解离常数的测定 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-56页 |
| ·rHuEPO-α蛋白的纯度 | 第39-40页 |
| ·WGA导向的亲和树脂筛选思路设计及WGA亲和树脂固定rHuEPO-α的可行性分析 | 第40-41页 |
| ·文库PCR扩增条件的优化 | 第41-42页 |
| ·ssDNA文库的制备方法 | 第42-43页 |
| ·WGA导向的亲和树脂SELEX筛选rHuEPO-α的有效性 | 第43-44页 |
| ·文库的EMSA实验结果 | 第44-45页 |
| ·适配体测序结果,结构模拟与家族划分 | 第45-52页 |
| ·部分适配体与靶蛋白rHuEPO-α结合率与选择性测定 | 第52-53页 |
| ·适配体与rHuEPO-α形成复合物的K_d值测定 | 第53页 |
| ·适配体807的特异性 | 第53-55页 |
| ·适配体807与813形成的复合物在EMSA中的行为差异 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第三章 rHuEPO-α的特异性寡核苷酸适配体807和813的结构研究 | 第58-74页 |
| ·引言 | 第58-59页 |
| ·仪器与试剂、材料 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·试剂与材料 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·适配体序列截短与rHuEPO-α的结合实验 | 第60页 |
| ·807截短序列解离常数的测定 | 第60-61页 |
| ·DNA甲基化实验 | 第61页 |
| ·去糖基化的rHuEPO-α与适配体结合研究 | 第61页 |
| ·适配体807-39nt与膀胱上皮组织切片的结合研究 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-72页 |
| ·序列813的截短研究 | 第62-63页 |
| ·序列807的截短研究 | 第63-65页 |
| ·序列807-39nt的G/A碱基在特异性识别中的作用 | 第65-66页 |
| ·适配体807-39nt的茎部结合位点研究 | 第66-68页 |
| ·适配体序列807-39nt的环部结合位点研究 | 第68-69页 |
| ·去糖基化后rHuEPO-α结合能力研究 | 第69-70页 |
| ·适配体807-39nt与重组EPO注射液的结合研究 | 第70-71页 |
| ·适配体807-39nt与人膀胱上皮正常组织和癌组织结合研究 | 第71-72页 |
| ·本章小结 | 第72-74页 |
| 第四章 基于寡核苷酸适配体的特异性识别rHuEPO-α的分子信标检测方法研究 | 第74-89页 |
| ·引言 | 第74-75页 |
| ·仪器与试剂 | 第75页 |
| ·仪器设备 | 第75页 |
| ·试剂 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-76页 |
| ·荧光测定 | 第75-76页 |
| ·样品溶液的配制 | 第76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-88页 |
| ·"Signal-off"模式 | 第76-78页 |
| ·"Signal-on"体系各条件优化考察 | 第78-84页 |
| ·"Signal-on"分子信标用于rHuEPO-α的检测 | 第84-86页 |
| ·"Signal-on"分子信标方法的特异性 | 第86页 |
| ·807-35nt的亲和力测定 | 第86-88页 |
| ·本章小结 | 第88-89页 |
| 结论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-98页 |
| 攻读学位期间发表、撰写学术论文目录 | 第98-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 附录 | 第101-130页 |
| 发表文章全文 | 第130-140页 |
| An aptameric molecular beacon-based "Signal-on" approach for rapid determination of rHuEPO-α | 第130-136页 |
| SELEX与适配体在蛋白质研究中的应用 | 第136-140页 |
