| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| ·玉米纹枯病 | 第13-14页 |
| ·玉米纹枯病的危害程度 | 第13页 |
| ·玉米纹枯病的症状表现 | 第13页 |
| ·玉米纹枯病的病原菌 | 第13-14页 |
| ·WRKY转录因子研究进展 | 第14-26页 |
| ·WRKY转录因子的起源 | 第15-16页 |
| ·WRKY转录因子的主要结构特点 | 第16-20页 |
| ·WRKY区 | 第16-19页 |
| ·转录调控区 | 第19-20页 |
| ·其它结构域 | 第20页 |
| ·WRKY蛋白与W盒的结合 | 第20-22页 |
| ·W盒 | 第20-21页 |
| ·WRKY蛋白与W盒的结合特性 | 第21-22页 |
| ·WRKY基因的表达特性及功能 | 第22-26页 |
| ·WRKY基因的表达 | 第22页 |
| ·WRKY基因的功能 | 第22-26页 |
| ·基因功能的研究方法 | 第26-28页 |
| ·基因功能预测方法 | 第26-27页 |
| ·基因的生物信息学分析 | 第26页 |
| ·基因的时空表达谱分析 | 第26-27页 |
| ·基因功能实验验证方法 | 第27-28页 |
| ·基因转导技术 | 第27页 |
| ·基因敲除和转基因技术 | 第27-28页 |
| ·人工染色体的转导 | 第28页 |
| ·反义技术 | 第28页 |
| ·siRNA与microRNA | 第28页 |
| ·其它技术 | 第28页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-49页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·载体、菌株和引物 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30-32页 |
| ·培养基的配制 | 第30-31页 |
| ·抗生素和激素配制 | 第31页 |
| ·溶液配制 | 第31-32页 |
| ·试剂盒 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-49页 |
| ·玉米材料的培育及处理 | 第32-33页 |
| ·病原菌培养 | 第33页 |
| ·WRKY62、71、76基因的分离 | 第33-37页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的合成 | 第33-34页 |
| ·引物的设计 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR | 第35页 |
| ·目的片段克隆测序 | 第35-37页 |
| ·WRKY62、71、76蛋白的原核表达 | 第37-41页 |
| ·目的基因CDS区的分离 | 第37-38页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中诱导表达 | 第40-41页 |
| ·WRKY62、71、76基因的表达模式分析 | 第41-43页 |
| ·实验材料的准备与处理 | 第41页 |
| ·总RNA提取及cDNA合成 | 第41-42页 |
| ·引物设计与合成 | 第42页 |
| ·实时荧光定量PCR引物的特异性检测 | 第42页 |
| ·标准品的制备和标准曲线的优化 | 第42-43页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和结果分析 | 第43页 |
| ·WRKY76的转基因功能验证 | 第43-49页 |
| ·WRKY76 CDS区的分离 | 第43页 |
| ·过量表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·转基因玉米材料的准备 | 第45页 |
| ·过量表达载体转化农杆菌 | 第45-46页 |
| ·侵染与移栽 | 第46-47页 |
| ·抗性植株的筛选 | 第47页 |
| ·T_0代转基因植株的PCR检测 | 第47-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-68页 |
| ·材料处理 | 第49页 |
| ·总RNA质量鉴定 | 第49-50页 |
| ·目的基因cDNA序列分离 | 第50页 |
| ·WRKY62、71、76蛋白的原核表达 | 第50-55页 |
| ·WRKY62、71、76基因CDS区的分离 | 第50-51页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·目的基因在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第52-55页 |
| ·重组质粒转化BL21 | 第52-53页 |
| ·三个融合蛋白诱导表达 | 第53-54页 |
| ·不同IPTG浓度对蛋白表达的影响 | 第54-55页 |
| ·融合蛋白可溶性分析 | 第55页 |
| ·WRKY62、71、76蛋白的表达模式分析 | 第55-63页 |
| ·引物特异性分析 | 第55-56页 |
| ·荧光定量结果准确性分析 | 第56-58页 |
| ·目的基因在立枯丝核菌胁迫下的表达模式分析 | 第58-60页 |
| ·WRKY62在立枯丝核菌胁迫下的差异表达分析 | 第58页 |
| ·WRKY71在立枯丝核菌胁迫下的差异表达分析 | 第58-59页 |
| ·WRKY76在立枯丝核菌胁迫下的差异表达分析 | 第59-60页 |
| ·目的基因在SA处理下的表达模式分析 | 第60-61页 |
| ·WRKY62在SA处理下的差异表达分析 | 第60页 |
| ·WRKY71在SA处理下的差异表达分析 | 第60-61页 |
| ·WRKY76在SA处理下的差异表达分析 | 第61页 |
| ·目的基因在MeJA处理下的表达模式分析 | 第61-63页 |
| ·WRKY62在MeJA处理下的差异表达分析 | 第61-62页 |
| ·WRKY71在MeJA处理下的差异表达分析 | 第62-63页 |
| ·WRKY76在MeJA处理下的差异表达分析 | 第63页 |
| ·WRKY76的转基因功能研究 | 第63-68页 |
| ·WRKY76 CDS区的分离 | 第63-64页 |
| ·WRKY76表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·pMD19-T-WRKY76和pCAMBIA3301的酶切 | 第64页 |
| ·阳性克隆筛选和重组质粒的酶切鉴定 | 第64-65页 |
| ·pCAMBIA3301-WRKY76转化农杆菌EHA105 | 第65页 |
| ·玉米茎尖转化获得转基因植株 | 第65-66页 |
| ·T_0代植株的PCR检测 | 第66-68页 |
| 第四章 讨论 | 第68-74页 |
| ·基因克隆序列与数据库中序列存在差异的原因 | 第68页 |
| ·原核表达 | 第68-70页 |
| ·原核宿主菌和载体的选择 | 第68-69页 |
| ·融合蛋白诱导条件优化 | 第69页 |
| ·融合蛋白的应用前景 | 第69-70页 |
| ·WRKY62、71、76基因的表达分析 | 第70-73页 |
| ·目的基因响应立枯丝核菌胁迫 | 第70-71页 |
| ·目的基因对SA和MeJA处理的响应 | 第71-72页 |
| ·目的基因在立枯丝核菌肋迫下的抗病反应机制 | 第72-73页 |
| ·玉米茎尖遗传转化 | 第73页 |
| ·后续工作 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |