| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-6页 |
| 引言 | 第6-8页 |
| 技术路线 | 第8-9页 |
| 第一章 材料与方法 | 第9-25页 |
| ·材料 | 第9-10页 |
| ·主要仪器设备 | 第9页 |
| ·质粒、菌株与细胞株 | 第9页 |
| ·主要实验试剂 | 第9-10页 |
| ·方法 | 第10-25页 |
| ·pIRES-CD59-linker-CD2重组质粒的构建 | 第10-19页 |
| ·PCR扩增引物的设计 | 第10-11页 |
| ·Jurkat细胞的培养 | 第11页 |
| ·Jurkat细胞内总RNA的提取 | 第11页 |
| ·目的基因的扩增 | 第11-12页 |
| ·CD59-T和CD2-T重组克隆载体的构建及鉴定 | 第12-16页 |
| ·CD59-pIRES重组表达载体的构建及鉴定 | 第16-17页 |
| ·pIRES-CD59-linker-CD2表达载体的构建及鉴定 | 第17-19页 |
| ·Jurkat细胞的转染及稳定转染细胞克隆的筛选 | 第19-23页 |
| ·Jurkat细胞的培养 | 第19页 |
| ·Jurkat细胞的转染 | 第19-20页 |
| ·稳定转染细胞克隆的建立 | 第20页 |
| ·稳定转染细胞阳性克隆的鉴定 | 第20-23页 |
| ·功能检测 | 第23-24页 |
| ·ZAP-70的Western Blot检测 | 第23页 |
| ·ELISA定量检测人白介素2(IL-2) | 第23-24页 |
| ·统计学分析 | 第24-25页 |
| 第二章 实验结果 | 第25-33页 |
| ·pIRES-CD59-linker-CD2重组质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·CD59和CD2片段的扩增 | 第25页 |
| ·CD59-T克隆载体的PCR及酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·CD2-T克隆载体的PCR及酶切鉴定 | 第26页 |
| ·阳性重组质粒pIRES-CD59-linker-CD2的PCR及酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·阳性重组质粒的测序结果 | 第27页 |
| ·重组质粒转染Jurkat细胞的筛选及鉴定 | 第27-30页 |
| ·Jurkat细胞的复苏与培养 | 第27页 |
| ·G418筛选稳定转染的阳性细胞克隆 | 第27-28页 |
| ·稳定转染细胞阳性克隆的鉴定 | 第28-30页 |
| ·功能检测结果 | 第30-33页 |
| ·ZAP-70的Western Blot检测 | 第30-31页 |
| ·Jurkat细胞IL-2表达水平的变化 | 第31-33页 |
| 第三章 讨论 | 第33-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 综述 | 第40-50页 |
| 综述的参考文献 | 第46-50页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第50-51页 |
| 附录 | 第51-58页 |
| 附录1 试剂的配制 | 第51-55页 |
| 附录2 CD59 cDNA序列 | 第55-56页 |
| 附录3 阳性重组质粒的测序图 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
