| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-6页 |
| 引言 | 第6-9页 |
| 技术路线 | 第9-10页 |
| 第一章 材料和方法 | 第10-21页 |
| ·材料 | 第10-11页 |
| ·主要仪器设备 | 第10页 |
| ·质粒、菌株与细胞株 | 第10页 |
| ·主要实验试剂 | 第10-11页 |
| ·方法 | 第11-21页 |
| ·pSUPER-siCD55重组载体的构建与鉴定 | 第11-16页 |
| ·pSUPER载体的选择 | 第11-12页 |
| ·编码CD55 siRNA寡核苷酸序列的设计与合成 | 第12页 |
| ·寡核苷酸链的退火 | 第12页 |
| ·pSUPER空质粒的双酶切 | 第12-13页 |
| ·琼脂糖电泳 | 第13页 |
| ·酶切产物大分子片段的回收 | 第13-14页 |
| ·寡核苷酸链和线性载体的连接 | 第14页 |
| ·重组质粒pSUPER-siCD55转化E.coli.JM109 | 第14页 |
| ·菌液PCR检测重组质粒 | 第14-15页 |
| ·菌种的保存及复苏 | 第15页 |
| ·碱裂解法提取转化菌质粒 | 第15-16页 |
| ·质粒双酶切和测序鉴定 | 第16页 |
| ·pSUPER-siCD59重组质粒的扩增和鉴定 | 第16页 |
| ·重组质粒pSUPER-siCD59转化E.coli.JM109 | 第16页 |
| ·质粒小提 | 第16页 |
| ·酶切产物电泳鉴定 | 第16页 |
| ·pSUPER-siCD55和pSUPER-siCD59分别稳定转染Jurakt细胞系 | 第16-18页 |
| ·Jurakt细胞的复苏和培养 | 第16-17页 |
| ·细胞计数 | 第17页 |
| ·重组质粒的稳定转染 | 第17页 |
| ·RT-PCR检测CD55和CD59mRNA表达 | 第17-18页 |
| ·MTT法测Jurakt细胞增殖 | 第18-19页 |
| ·激光共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度 | 第19页 |
| ·Western blot检测Src家族酪氨酸激酶(Src PTK)磷酸化 | 第19-20页 |
| ·统计学方法 | 第20-21页 |
| 第二章 结果 | 第21-29页 |
| ·pSUPER-siCD55重组载体的鉴定 | 第21-22页 |
| ·菌液PCR检测 | 第21页 |
| ·双酶切鉴定 | 第21页 |
| ·DNA序列鉴定 | 第21-22页 |
| ·pSUPER-siCD59重组质粒的酶切鉴定 | 第22页 |
| ·重组质粒转染Jurakt细胞的筛选和鉴定 | 第22-25页 |
| ·细胞培养结果 | 第22-23页 |
| ·转染效率的测定 | 第23-24页 |
| ·RT-PCR检测 | 第24-25页 |
| ·MTT结果 | 第25-26页 |
| ·细胞[Ca~(2+)]i结果 | 第26-27页 |
| ·Src PTK磷酸化结果 | 第27-29页 |
| 第三章 讨论 | 第29-33页 |
| 结论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-36页 |
| 综述 | 第36-48页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 硕士研究生期间发表的文章 | 第48-49页 |
| 附录 | 第49-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
