| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·生物固氮 | 第11-13页 |
| ·生物固氮的概述 | 第11-12页 |
| ·生物固氮的种类 | 第12-13页 |
| ·施氏假单胞菌A1501的研究现状 | 第13-14页 |
| ·铵载体的研究进展 | 第14-19页 |
| ·铵载体的简介 | 第14-15页 |
| ·铵载体的结构和运输 | 第15-17页 |
| ·AmtB蛋白与PⅡ蛋白的结合及其调控作用 | 第17-18页 |
| ·AmtB蛋白对固氮酶的修饰调控 | 第18-19页 |
| ·AmtB功能的假说 | 第19页 |
| ·研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| ·课题来源 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-38页 |
| ·实验材料与仪器 | 第22-25页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·酶和化学试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·常用溶液 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-38页 |
| ·碱裂解法小量提取细菌质粒 | 第25-26页 |
| ·基因的PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第27-28页 |
| ·酶切及连接反应 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28-30页 |
| ·三亲本结合实验 | 第30页 |
| ·生长曲线的测定 | 第30-31页 |
| ·固氮酶活性的测定 | 第31页 |
| ·Biorad法测定全细胞的蛋白含量 | 第31-32页 |
| ·NH_4~+浓度的测定 | 第32页 |
| ·Biolog分析野生型与突变株对碳源的利用情况 | 第32-33页 |
| ·RNA的提取 | 第33页 |
| ·cDNA链的合成 | 第33-34页 |
| ·荧光实时定量PCR反应 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第35-36页 |
| ·变性蛋白SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| ·Western Blot杂交检测 | 第37-38页 |
| 3. 结论与分析 | 第38-53页 |
| ·施氏假单胞菌A1501 AmtB与其它菌中同源蛋白的进化分析 | 第38-39页 |
| ·amtB缺失突变株的构建 | 第39-42页 |
| ·缺失突变株的构建原理 | 第39-40页 |
| ·amtB基因重组载体的构建 | 第40-41页 |
| ·缺失突变株的筛选与验证 | 第41-42页 |
| ·功能互补菌株的构建 | 第42页 |
| ·amtB突变株表型鉴定 | 第42-49页 |
| ·野生型和突变株生长曲线的测定 | 第42-43页 |
| ·突变株对铵的吸收检测 | 第43-44页 |
| ·突变株固氮酶活的测定 | 第44-45页 |
| ·铵冲击对突变株固氮酶活的影响 | 第45-46页 |
| ·铵冲击下和固氮条件下nif基因的表达情况分析 | 第46-47页 |
| ·突变株泌铵的检测 | 第47-48页 |
| ·Biolog分析野生型与突变株对95种碳源的代谢谱变 | 第48-49页 |
| ·GlnK蛋白的表达和纯化 | 第49-52页 |
| ·GlnK蛋白表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·GlnK蛋白的原核高效表达 | 第50页 |
| ·GlnK蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·Western Blot检测GlnK在A1501中的表达 | 第51-52页 |
| ·推测的AmtB介导的调控机制 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·施氏假单胞菌A1501的amtB突变株的ΔamtB生长情况 | 第53页 |
| ·突变株ΔamtB的泌铵现象 | 第53页 |
| ·施氏假单胞菌A1501固氮酶活的铵抑制现象 | 第53-54页 |
| ·AmtB调节固氮酶活的机制 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
