| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 縮略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 灰葡萄孢菌的研究进展 | 第12-19页 |
| ·灰葡萄孢菌的分布和危害 | 第12页 |
| ·灰葡萄孢菌的形态特征 | 第12-13页 |
| ·灰葡萄孢菌的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·灰霉病的病害循环及其影响因素 | 第14-15页 |
| ·灰葡萄孢菌的侵染过程 | 第15页 |
| ·灰葡萄孢菌的致病机理 | 第15-18页 |
| ·灰霉病的防治 | 第18-19页 |
| 2 真菌遗传转化的研究进展 | 第19-20页 |
| 3 基因功能的研究策略 | 第20-22页 |
| 4 本实验的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 灰葡萄孢BC1G_08931基因沉默载体和超表达载体的构建 | 第23-48页 |
| 1 材料与方法 | 第23-38页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·菌株 | 第23-24页 |
| ·载体 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·质粒抽提溶液 | 第24-25页 |
| ·其它溶液及试剂 | 第25-26页 |
| ·设备仪器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-38页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因的序列分析 | 第26页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因的表达分析 | 第26-29页 |
| ·灰葡萄孢基因组RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·cDNA的合成 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR检测灰葡萄孢BC1G_08931基因的表达量 | 第28-29页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因沉默片段的扩增 | 第29页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第29-30页 |
| ·目的片段与克隆载体连接 | 第30页 |
| ·重组质粒的热击转化 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的筛选、鉴定和质粒提取 | 第31页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因沉默载体的构建 | 第31-34页 |
| ·沉默载体重组质粒的农杆菌电击转化 | 第34-35页 |
| ·农杆菌电击感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·农杆菌电击转化 | 第34-35页 |
| ·农杆菌重组质粒的鉴定 | 第35页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因超表达片段的扩增 | 第35-36页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因超表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·超表达载体重组质粒电击转化 | 第37-38页 |
| ·超表达重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的电击转化农杆菌 | 第38页 |
| ·农杆菌重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-46页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因的序列分析 | 第38-40页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因的表达分析 | 第40-41页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因沉默片段的克隆 | 第41-43页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因沉默载体的构建及验证 | 第43-44页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因沉默载体重组质粒转入农杆菌鉴定 | 第44页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因超表达载体的构建及其验证 | 第44-46页 |
| ·灰葡萄孢BC1G_08931基因超表达载体重组质粒转入农杆菌鉴定 | 第46页 |
| 3 小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 灰葡萄孢BC1G_08931基因功能的初步研究 | 第48-73页 |
| 1 材料与方法 | 第48-57页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·菌株及载体 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·其他试剂及溶液 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-57页 |
| ·农杆菌介导沉默载体转化灰葡萄孢菌株CanBC-3V | 第50-51页 |
| ·农杆菌介导超表达载体转化灰葡萄孢菌株CanBC-3V | 第51页 |
| ·转化子的PCR验证 | 第51-52页 |
| ·DNA提取 | 第51-52页 |
| ·PCR验证 | 第52页 |
| ·转化子的RT-PCR验证 | 第52页 |
| ·转化子的Real-time PCR验证 | 第52-53页 |
| ·转化子的纯化 | 第53页 |
| ·转化子的形态特征 | 第53-55页 |
| ·菌丝生长速度的测定 | 第53-54页 |
| ·菌丝尖端观察 | 第54页 |
| ·孢子形态观察 | 第54-55页 |
| ·转化子致病力的测定 | 第55-56页 |
| ·转化子在油菜叶片上致病力测定 | 第55页 |
| ·转化子在番茄上的致病力测定 | 第55-56页 |
| ·转化子产酸能力的测定 | 第56页 |
| ·转化子生物产量测定 | 第56页 |
| ·转化子菌核形成能力的测定 | 第56页 |
| ·转化子在不同碳源培养基上的生长速度测定 | 第56-57页 |
| ·转化子在不同温度下的生长速度的测定 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-71页 |
| ·转化子的验证 | 第57-60页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第57-58页 |
| ·转化子的RT-PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·转化子的Real-time PCR鉴定 | 第59-60页 |
| ·转化子形态特征 | 第60-64页 |
| ·菌丝生长速度 | 第60-61页 |
| ·菌丝形态 | 第61-62页 |
| ·菌落形态 | 第62-64页 |
| ·孢子形态 | 第64页 |
| ·转化子产酸能力的测定 | 第64-65页 |
| ·转化子致病力的测定 | 第65-67页 |
| ·转化子生物产量的测定 | 第67-68页 |
| ·转化子菌核形成能力的测定 | 第68-70页 |
| ·转化子在不同碳源培养基上的生长速度测定 | 第70-71页 |
| ·转化子在不同温度条件下的生长速度测定 | 第71页 |
| 3 小结与讨论 | 第71-73页 |
| 第四章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
