| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 第一部分 人血管内皮生长因子在肿瘤广谱筛查和临床诊断中的应用 | 第13-29页 |
| 一 恶性肿瘤是全球健康的第一大杀手 | 第13页 |
| 二 早发现和早诊断是肿瘤防治的关键 | 第13-14页 |
| 三 VEGF是肿瘤筛查和辅助诊断新的和广谱标志物 | 第14-16页 |
| (1) VEGF及其受体生物学 | 第14-15页 |
| (2) Folkman理论与肿瘤生长 | 第15-16页 |
| 四 血管生长因子(VEGF)是最主要的血管生成刺激因子 | 第16-17页 |
| (1) VEGF与肿瘤诊断研究进展 | 第16-17页 |
| (2) VEGF与抗肿瘤治疗研究进展 | 第17页 |
| 五 VEGF在肿瘤广谱筛查和辅助诊断研究进展 | 第17-20页 |
| (1) VEGF是肿瘤广谱筛查和辅助诊断血液标志物 | 第17-18页 |
| (2) VEGF与肿瘤预后 | 第18-19页 |
| (3) VEGF治疗评估与监测 | 第19页 |
| (4) VEGF复发的监测 | 第19页 |
| (5) 几个相关问题 | 第19-20页 |
| 六 VEGF酶联免疫方法学研究进展 | 第20页 |
| 七 科学问题和发展方向 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-29页 |
| 第二部分 hVEGF和sFlt-1在原核表达系统中的克隆、表达、纯化及功能性研究 | 第29-79页 |
| 一 概述 | 第29-32页 |
| 二 技术路线 | 第32-33页 |
| 三 实验材料 | 第33-38页 |
| 1 大肠杆菌感受态细胞 | 第33页 |
| 2 载体 | 第33-34页 |
| 3 分子生物学试剂 | 第34-35页 |
| 4 化学试剂及药品 | 第35-36页 |
| 5 仪器设备 | 第36-38页 |
| 四、 实验方法及过程 | 第38-54页 |
| 1 VEGF165及sFlt-1目的基因的获得 | 第38-40页 |
| 2 重组克隆载体pMD19-T/VEGF165和pMD19-T/sFlt-1的构建并转化 | 第40-42页 |
| 3 重组表达载体pGEX-4T-1/VEGF165和pGEX-4T-1/sFlt-1的构建和转化 | 第42-45页 |
| 4 目的蛋白VEGF165表达条件的确定 | 第45-47页 |
| 5 GST-VEGF165和GST-sFlt-1蛋白的大量表达及蛋白与Sepharose 4B胶结合优化 | 第47-48页 |
| 6 与谷胱甘肽Sepharose 4B胶结合的GST-VEGF165、GST-sFlt-1蛋白的洗脱方法的优化 | 第48-49页 |
| 7 Western Blot分析GST-VEGF165和GST-sFlt-1两种蛋白表达 | 第49-50页 |
| 8 纯化后的目的蛋白纯度分析 | 第50页 |
| 9 纯化后目的蛋白浓度测定 | 第50-52页 |
| 10 鸡胚尿囊膜实验 | 第52页 |
| 11 结合实验 | 第52-54页 |
| 五 实验结果 | 第54-69页 |
| 1 目的基因的获得 | 第54-55页 |
| 2 重组克隆载体pMD19—T/VEGF165与pMD19—T/sFlt-1的构建并转化 | 第55页 |
| 3 重组表达载体pGEX-4T-1/VEGF165、pGEX-4T-1/sFlt-1的构建并转化 | 第55-57页 |
| 4 目的蛋白VEGF165表达条件的确定4.1观察IPTG诱导下表达菌是否表达目的蛋白 | 第57-60页 |
| 5 目的蛋白的大量表达及蛋白与Sepharose 4B胶结合并洗脱的优化 | 第60-61页 |
| 6 纯化后的目的蛋白纯度分析 | 第61-65页 |
| 7 Western Blot分析GST-VEGF165和GST-sFlt-1两种蛋白表达 | 第65-66页 |
| 8 尿囊膜实验 | 第66-68页 |
| 9 结合实验 | 第68-69页 |
| 六 讨论 | 第69-75页 |
| 一 pGEX-4T-1/VEGF_(165)和pGEX-4T-1/sFlt-1质粒的构建 | 第69-70页 |
| 二 GST-VEGF_(165)和GST-sFlt-1蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第70-72页 |
| 三 表达目的蛋白GST-VEGF_(165)和GST-sFlt-1的大肠杆菌的裂解、纯化 | 第72-73页 |
| 四 GST-VEGF165和GST-sFlt-1蛋白相关功能性试验 | 第73-75页 |
| 七 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 附录 | 第79-88页 |
| 一 英文缩略语 | 第79-80页 |
| 二 溶液配制 | 第80页 |
| 三 培养基的配制 | 第80-81页 |
| 四 纯化过程中用到的溶液的配制 | 第81-82页 |
| 五 基因序列 | 第82-88页 |
| 硕士在读期间发表论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
