| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-29页 |
| ·结核病及其病原菌 | 第12-13页 |
| ·结核病流行病学 | 第13-14页 |
| ·全球结核病疫情现状 | 第13页 |
| ·中国结核病疫情现状 | 第13-14页 |
| ·结核病治疗及其遇到的问题 | 第14-16页 |
| ·现代结核病治疗方案发展史 | 第14-15页 |
| ·现代结核病治疗中的主要问题 | 第15-16页 |
| ·结核病和 HIV 的共感染 | 第16页 |
| ·现有的抗结核药物 | 第16-18页 |
| ·异烟肼 | 第16-17页 |
| ·吡嗪酰胺 | 第17-18页 |
| ·利福平 | 第18页 |
| ·乙胺丁醇 | 第18页 |
| ·开发新型抗结核药物的挑战 | 第18-19页 |
| ·药物筛选方法 | 第19-20页 |
| ·基因手段确定靶标 | 第19页 |
| ·全细胞水平的高通量筛选 | 第19-20页 |
| ·结构生物学和虚拟筛选 | 第20页 |
| ·临床试验中的新药 | 第20-24页 |
| ·氟喹诺酮类 | 第20页 |
| ·利福平类似物 | 第20-21页 |
| ·利福拉齐 | 第21页 |
| ·SQ109 | 第21-22页 |
| ·TMC207 | 第22页 |
| ·LL-3858 | 第22-23页 |
| ·硝基咪唑类 | 第23页 |
| ·OPC-67683 | 第23-24页 |
| ·已批准用于结核病治疗的非抗结核药物 | 第24-25页 |
| ·利奈唑胺 | 第24页 |
| ·β-内酰胺类 | 第24-25页 |
| ·吩噻嗪类 | 第25页 |
| ·确定药物靶标的方法 | 第25-27页 |
| ·通过基因手段验证抗结核化合物的作用靶标 | 第26页 |
| ·利用蛋白质组学技术研究抗结核化合物的作用靶标 | 第26-27页 |
| ·本课题研究目的、意义及主要研究内容 | 第27-28页 |
| ·创新点 | 第28页 |
| ·展望 | 第28-29页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第29-40页 |
| ·质粒和菌种 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·试剂与溶液 | 第30-31页 |
| ·分子克隆试剂 | 第30页 |
| ·基因组提取所需试剂 | 第30页 |
| ·双向电泳所需试剂 | 第30页 |
| ·溶液 | 第30-31页 |
| ·过表达 H37Rv aroE 的 H37Ra 菌株的构建 | 第31-35页 |
| ·结核分枝杆菌 H37Rv 基因组提取 | 第31页 |
| ·沉淀基因组 DNA | 第31-32页 |
| ·基因组 DNA 定量 | 第32页 |
| ·引物设计与合成 | 第32页 |
| ·aroE 基因的扩增 | 第32-33页 |
| ·重组质粒构建 | 第33页 |
| ·目的基因的克隆 | 第33页 |
| ·重组质粒转化入大肠杆菌 | 第33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| ·结核分枝杆菌 H37Ra 感受态制备和转化 | 第34-35页 |
| ·重组结核分枝杆菌的鉴定 | 第35页 |
| ·野生型和重组菌株 T8011 MIC 测定 | 第35页 |
| ·亚抑制条件下 T8011 对结核分枝杆菌蛋白表达谱的影响 | 第35-38页 |
| ·T8011 对 H37Ra 生长的影响 | 第35页 |
| ·菌株培养 | 第35-36页 |
| ·蛋白样品的准备 | 第36页 |
| ·聚焦电泳 | 第36-37页 |
| ·胶条平衡 | 第37页 |
| ·IPG 胶条的转移 | 第37页 |
| ·第二向 SDS-PAGE 电泳 | 第37-38页 |
| ·银染 | 第38页 |
| ·凝胶图像分析 | 第38-39页 |
| ·MALDI-TOF-TOF 图谱分析 | 第39-40页 |
| 第三章 结果分析与讨论 | 第40-55页 |
| ·过表达 H37Rv aroE 的重组 H37Ra 菌株构建 | 第40-42页 |
| ·H37Rv 基因组提取 | 第40页 |
| ·aroE 基因的 PCR 扩增 | 第40页 |
| ·重组质粒的检测 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的验证 | 第41-42页 |
| ·电转化条件的确定 | 第42页 |
| ·重组结核分枝杆菌的鉴定 | 第42页 |
| ·T8011 对野生型菌株和重组菌株的 MIC 测定 | 第42-43页 |
| ·亚抑制条件下 T8011 对结核分枝杆菌蛋白表达谱的影响 | 第43-55页 |
| ·T8011 对 H37Ra 生长的影响 | 第43-44页 |
| ·标准曲线及蛋白样品浓度测定 | 第44页 |
| ·双向电泳及质谱鉴定结果 | 第44-55页 |
| 第四章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-67页 |
| 附录 aroE 基因序列 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第70页 |
