摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-14页 |
第1章 绪论 | 第14-41页 |
·课题来源、背景及意义 | 第14-15页 |
·国内外研究现状 | 第15-39页 |
·肌抑素(Myostatin) | 第16-29页 |
·逆转录病毒与转基因鸡 | 第29-36页 |
·我国关于转基因鸡和myostatin的研究现状 | 第36-38页 |
·RNA干扰(RNAi)技术的选择 | 第38-39页 |
·学位论文的主要内容 | 第39-41页 |
第2章 转基因鸡技术平台的建立 | 第41-73页 |
·材料与方法 | 第41-53页 |
·实验材料 | 第41-42页 |
·实验方法 | 第42-53页 |
·结果 | 第53-66页 |
·重组EGFP逆转录病毒表达载体的构建 | 第53-54页 |
·亲嗜性病毒的包装 | 第54-59页 |
·泛嗜性病毒的包装 | 第59-63页 |
·泛嗜性病毒介导法制备转基因鸡 | 第63-66页 |
·讨论 | 第66-71页 |
·亲嗜性病毒包装技术平台的建立 | 第66-67页 |
·泛嗜性VSV-G病毒包装技术平台的建立 | 第67-69页 |
·转基因鸡技术平台的建立 | 第69-71页 |
·本章小节 | 第71-73页 |
第3章 Myostatin在鸡胚胎发育早期的功能初探 | 第73-103页 |
·引言 | 第73-74页 |
·材料与方法 | 第74-84页 |
·实验材料 | 第74-75页 |
·鸡myostatin基因RNAi靶序列设计 | 第75页 |
·重组逆转录RNAi病毒载体的构建 | 第75-76页 |
·重组RNAi逆转录病毒表达载体的封闭myostatin活性分析 | 第76-77页 |
·重组RNAi逆转录病毒的包装和超离浓缩 | 第77页 |
·RNAi重组病毒体外感染CEM及分析 | 第77-80页 |
·RNAi组重病毒体内感染鸡胚及分析 | 第80-84页 |
·结果 | 第84-99页 |
·重组RNAi逆转录病毒表达载体的构建 | 第84页 |
·RNAi封闭活性的检测 | 第84-86页 |
·RNAi病毒体外感染CEM分析 | 第86-90页 |
·病毒体内感染鸡胚分析 | 第90-93页 |
·原位杂交(ISH)分析 | 第93-99页 |
·讨论 | 第99-101页 |
·本章小结 | 第101-103页 |
第4章 Myostatin在雏鸡胸肌发育中的功能初探 | 第103-127页 |
·引言 | 第103-104页 |
·研究方法 | 第104-106页 |
·Myostatin重组表达载体的构建 | 第104页 |
·Myostatin重组RNAi和表达载体转染CEM | 第104页 |
·重组myostatin和hIGF-1 蛋白处理CEM | 第104页 |
·重组Myostatin质粒和病毒接种雏鸡胸肌 | 第104页 |
·接毒雏鸡的复制完全型病毒检测 | 第104-105页 |
·Western blot分析 | 第105页 |
·细胞增生计数和统计分析 | 第105页 |
·胸肌组织切片的制备 | 第105-106页 |
·结果 | 第106-123页 |
·Myostatin重组表达载体的构建 | 第106页 |
·CEM中myostatin表达下调和上调分析 | 第106-111页 |
·MSTN、IGF-1 处理CEM分析 | 第111-115页 |
·接种病毒和重组质粒的胸肌分析 | 第115-123页 |
·讨论 | 第123-125页 |
·本章小结 | 第125-127页 |
第5章 Myostatin基因启动子的活性分析 | 第127-149页 |
·引言 | 第127-128页 |
·材料与方法 | 第128-132页 |
·细胞及试剂 | 第128页 |
·基因组DNA的提取 | 第128-129页 |
·Myostatin基因启动子的克隆 | 第129页 |
·Myostatin启动子的生物信息学分析 | 第129页 |
·重组pGL3 表达载体的构建 | 第129-130页 |
·细胞转染与蛋白回收 | 第130页 |
·启动子活性分析 | 第130-131页 |
·-19bp和+82bp的定点突变分析 | 第131-132页 |
·统计分析 | 第132页 |
·结果 | 第132-145页 |
·肉鸡和蛋鸡myostatin基因启动子序列分析 | 第132-136页 |
·启动子的关键元件分析 | 第136-139页 |
·不同长度启动子片段重组表达载体的构建 | 第139页 |
·肉鸡和蛋鸡myostatin基因启动子荧光素酶活性分析 | 第139-140页 |
·肉鸡和蛋鸡myostatin基因启动子活性比较分析 | 第140-143页 |
·肉鸡和蛋鸡myostatin启动子的关键转录因子分析 | 第143-144页 |
·肉鸡myostatin启动子的定点突变分析 | 第144页 |
·肉鸡-196p位点分析 | 第144-145页 |
·讨论 | 第145-147页 |
·本章小结 | 第147-149页 |
结论 | 第149-151页 |
参考文献 | 第151-166页 |
附录 | 第166-169页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第169-171页 |
致谢 | 第171-172页 |
索引 | 第172-173页 |
个人简历 | 第173页 |