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利用转基因技术研究肌抑素基因对鸡骨骼肌发育的影响

摘要第1-5页
Abstract第5-14页
第1章 绪论第14-41页
   ·课题来源、背景及意义第14-15页
   ·国内外研究现状第15-39页
     ·肌抑素(Myostatin)第16-29页
     ·逆转录病毒与转基因鸡第29-36页
     ·我国关于转基因鸡和myostatin的研究现状第36-38页
     ·RNA干扰(RNAi)技术的选择第38-39页
   ·学位论文的主要内容第39-41页
第2章 转基因鸡技术平台的建立第41-73页
   ·材料与方法第41-53页
     ·实验材料第41-42页
     ·实验方法第42-53页
   ·结果第53-66页
     ·重组EGFP逆转录病毒表达载体的构建第53-54页
     ·亲嗜性病毒的包装第54-59页
     ·泛嗜性病毒的包装第59-63页
     ·泛嗜性病毒介导法制备转基因鸡第63-66页
   ·讨论第66-71页
     ·亲嗜性病毒包装技术平台的建立第66-67页
     ·泛嗜性VSV-G病毒包装技术平台的建立第67-69页
     ·转基因鸡技术平台的建立第69-71页
   ·本章小节第71-73页
第3章 Myostatin在鸡胚胎发育早期的功能初探第73-103页
   ·引言第73-74页
   ·材料与方法第74-84页
     ·实验材料第74-75页
     ·鸡myostatin基因RNAi靶序列设计第75页
     ·重组逆转录RNAi病毒载体的构建第75-76页
     ·重组RNAi逆转录病毒表达载体的封闭myostatin活性分析第76-77页
     ·重组RNAi逆转录病毒的包装和超离浓缩第77页
     ·RNAi重组病毒体外感染CEM及分析第77-80页
     ·RNAi组重病毒体内感染鸡胚及分析第80-84页
   ·结果第84-99页
     ·重组RNAi逆转录病毒表达载体的构建第84页
     ·RNAi封闭活性的检测第84-86页
     ·RNAi病毒体外感染CEM分析第86-90页
     ·病毒体内感染鸡胚分析第90-93页
     ·原位杂交(ISH)分析第93-99页
   ·讨论第99-101页
   ·本章小结第101-103页
第4章 Myostatin在雏鸡胸肌发育中的功能初探第103-127页
   ·引言第103-104页
   ·研究方法第104-106页
     ·Myostatin重组表达载体的构建第104页
     ·Myostatin重组RNAi和表达载体转染CEM第104页
     ·重组myostatin和hIGF-1 蛋白处理CEM第104页
     ·重组Myostatin质粒和病毒接种雏鸡胸肌第104页
     ·接毒雏鸡的复制完全型病毒检测第104-105页
     ·Western blot分析第105页
     ·细胞增生计数和统计分析第105页
     ·胸肌组织切片的制备第105-106页
   ·结果第106-123页
     ·Myostatin重组表达载体的构建第106页
     ·CEM中myostatin表达下调和上调分析第106-111页
     ·MSTN、IGF-1 处理CEM分析第111-115页
     ·接种病毒和重组质粒的胸肌分析第115-123页
   ·讨论第123-125页
   ·本章小结第125-127页
第5章 Myostatin基因启动子的活性分析第127-149页
   ·引言第127-128页
   ·材料与方法第128-132页
     ·细胞及试剂第128页
     ·基因组DNA的提取第128-129页
     ·Myostatin基因启动子的克隆第129页
     ·Myostatin启动子的生物信息学分析第129页
     ·重组pGL3 表达载体的构建第129-130页
     ·细胞转染与蛋白回收第130页
     ·启动子活性分析第130-131页
     ·-19bp和+82bp的定点突变分析第131-132页
     ·统计分析第132页
   ·结果第132-145页
     ·肉鸡和蛋鸡myostatin基因启动子序列分析第132-136页
     ·启动子的关键元件分析第136-139页
     ·不同长度启动子片段重组表达载体的构建第139页
     ·肉鸡和蛋鸡myostatin基因启动子荧光素酶活性分析第139-140页
     ·肉鸡和蛋鸡myostatin基因启动子活性比较分析第140-143页
     ·肉鸡和蛋鸡myostatin启动子的关键转录因子分析第143-144页
     ·肉鸡myostatin启动子的定点突变分析第144页
     ·肉鸡-196p位点分析第144-145页
   ·讨论第145-147页
   ·本章小结第147-149页
结论第149-151页
参考文献第151-166页
附录第166-169页
攻读学位期间发表的学术论文第169-171页
致谢第171-172页
索引第172-173页
个人简历第173页

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