| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-38页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| ·国内外的研究综述 | 第17-36页 |
| ·植物病害生物防治的发展动态 | 第17-20页 |
| ·生物防治菌哈茨木霉研究现状 | 第20-27页 |
| ·蛋白酶基因研究进展 | 第27-33页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第33-36页 |
| ·存在的问题 | 第36-37页 |
| ·课题的来源及主要研究内容 | 第37-38页 |
| ·课题来源 | 第37页 |
| ·主要研究内容 | 第37-38页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第38-57页 |
| ·实验材料 | 第38-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·实验药品和工具酶 | 第39-40页 |
| ·缓冲液和常用试剂的配制 | 第40-42页 |
| ·实验仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-57页 |
| ·哈茨木霉菌丝培养 | 第43页 |
| ·哈茨木霉菌丝体总RNA的提取 | 第43页 |
| ·消化DNA | 第43-44页 |
| ·单链RACE模板的合成 | 第44-45页 |
| ·基因组DNA提取方法 | 第45页 |
| ·生物信息学方法 | 第45页 |
| ·RACE技术克隆目的基因 | 第45-47页 |
| ·蛋白酶在哈茨木霉中的表达模式分析 | 第47-48页 |
| ·斑点杂交检测 | 第48-50页 |
| ·表达载体构建 | 第50-51页 |
| ·酿酒酵母生长曲线的测定 | 第51页 |
| ·酿酒酵母的转化 | 第51-52页 |
| ·酵母转化子的鉴定 | 第52-53页 |
| ·Northern印迹杂交检测 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第54页 |
| ·酵母转化子蛋白酶活性检测 | 第54-56页 |
| ·蛋白酶发酵液对不同植物病原菌生物防治能力的研究 | 第56-57页 |
| 第3章 哈茨木霉蛋白酶基因的克隆、序列分析及表达模式研究 | 第57-95页 |
| ·菌丝体总RNA, DNA提取及RACE模板合成 | 第57-59页 |
| ·哈茨木霉菌丝体高质量RNA的提取 | 第57页 |
| ·反转录合成单链3′RACE及5′RACE cDNA模板 | 第57-58页 |
| ·哈茨木霉菌丝体高质量DNA提取 | 第58-59页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶基因sl41 的克隆及序列分析 | 第59-66页 |
| ·利用SMART RACE 获得sl41 全长cDNA序列 | 第59-62页 |
| ·sl41 基因DNA序列的克隆 | 第62页 |
| ·sl41 基因多序列比对 | 第62-64页 |
| ·sl41 基因保守区分析及信号肽预测 | 第64-65页 |
| ·sl41 基因三级结构分析 | 第65-66页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶基因ss10 的克隆及序列分析 | 第66-72页 |
| ·利用SMART RACE 获得ss10 全长cDNA序列 | 第66-68页 |
| ·ss10 基因DNA序列的克隆 | 第68页 |
| ·ss10 基因多序列比对 | 第68-69页 |
| ·ss10 基因保守区分析 | 第69-71页 |
| ·ss10 基因信号肽分析 | 第71页 |
| ·ss10 基因三级结构分析 | 第71-72页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶基因sa76 的克隆及序列分析 | 第72-77页 |
| ·利用SMART RACE 获得sa76 全长cDNA序列 | 第72-74页 |
| ·sa76 基因DNA序列的克隆 | 第74-75页 |
| ·sa76 基因多序列比对 | 第75-76页 |
| ·sa76 基因保守区分析 | 第76-77页 |
| ·sa76 基因信号肽分析 | 第77页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶基因asp83 的克隆及序列分析 | 第77-82页 |
| ·asp83 基因全长cDNA序列的获得 | 第77-79页 |
| ·asp83 基因多序列比对 | 第79-81页 |
| ·asp83 基因保守区分析及三级结构预测 | 第81-82页 |
| ·蛋白酶基因在不同诱导条件下的差异表达 | 第82-86页 |
| ·sl41 基因在不同诱导条件下的差异表达 | 第82-83页 |
| ·ss10 基因在不同诱导条件下的差异表达 | 第83-84页 |
| ·sa76 基因在不同诱导条件下的差异表达 | 第84-85页 |
| ·asp83 基因在不同诱导条件下的差异表达 | 第85-86页 |
| ·关于蛋白酶基因的克隆、序列分析及表达模式的讨论 | 第86-94页 |
| ·RACE技术的应用 | 第86-87页 |
| ·功能基因的生物信息学分析 | 第87-88页 |
| ·哈茨木霉sl41 基因的克隆及表达规律 | 第88-90页 |
| ·哈茨木霉ss10 基因的克隆及表达规律 | 第90-91页 |
| ·哈茨木霉sa76 基因的克隆及表达规律 | 第91-93页 |
| ·哈茨木霉asp83 基因的克隆及表达规律 | 第93-94页 |
| ·本章小结 | 第94-95页 |
| 第4章 哈茨木霉蛋白酶基因酵母表达研究 | 第95-119页 |
| ·酿酒酵母生长曲线 | 第95-96页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶基因sl41 酵母表达 | 第96-101页 |
| ·sl41 基因酵母表达载体构建及转化 | 第96-98页 |
| ·sl41 基因酵母表达Northern杂交检测 | 第98页 |
| ·sl41 基因酵母表达SDS-PAGE分析 | 第98-99页 |
| ·转sl41 基因酵母酶学特性分析 | 第99-101页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶基因ss10 酵母表达 | 第101-105页 |
| ·ss10 基因酵母表达载体构建及转化 | 第101-103页 |
| ·ss10 酵母表达Northern印迹杂交检测 | 第103页 |
| ·ss10 基因酵母表达SDS-PAGE分析 | 第103页 |
| ·转ss10 基因酵母枯草杆菌蛋白酶特性分析 | 第103-105页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶基因sa76 酵母表达 | 第105-110页 |
| ·sa76 基因酵母表达载体构建及转化 | 第105-107页 |
| ·sa76 酵母表达Northern印迹杂交检测 | 第107-108页 |
| ·sa76 基因酵母表达SDS-PAGE分析 | 第108页 |
| ·转sa76 基因酵母天冬氨酸蛋白酶酶学特性分析 | 第108-110页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶基因asp83 酵母表达 | 第110-113页 |
| ·asp83 基因酵母表达载体构建及转化 | 第110-111页 |
| ·asp83 酵母表达Northern印迹杂交检测 | 第111-112页 |
| ·转asp83 基因酵母天冬氨酸蛋白酶酶学特性分析 | 第112-113页 |
| ·关于哈茨木霉蛋白酶基因酵母表达的讨论 | 第113-117页 |
| ·表达系统的选择 | 第113-115页 |
| ·影响外源基因表达的因素 | 第115-116页 |
| ·蛋白酶酶学性质的分析 | 第116-117页 |
| ·本章小结 | 第117-119页 |
| 第5章 哈茨木霉蛋白酶对不同植物病原菌生物防治功能的研究 | 第119-133页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶SL41 对五种植物病原菌的生物防治 | 第120-121页 |
| ·SL41 对5 种病原真菌菌丝生长的抑制作用 | 第120-121页 |
| ·SL41 对5 种病原真菌的拮抗作用 | 第121页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶SS10 对五种植物病原菌的生物防治 | 第121-124页 |
| ·SS10 对5 种病原真菌菌丝生长的抑制作用 | 第121-123页 |
| ·SS10 对5 种病原真菌的拮抗作用 | 第123-124页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶SA76 对五种植物病原菌的生物防治 | 第124-127页 |
| ·SA76 对5 种病原真菌菌丝生长的抑制作用 | 第124-125页 |
| ·SA76 对5 种病原真菌的拮抗作用 | 第125-127页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶ASP83 对五种植物病原菌的生物防治 | 第127-129页 |
| ·ASP83 对5 种病原真菌菌丝生长的抑制作用 | 第127页 |
| ·ASP83 对5 种病原真菌的拮抗作用 | 第127-129页 |
| ·关于哈茨木霉蛋白酶对几种病原菌生物防治能力的讨论 | 第129-132页 |
| ·本章小结 | 第132-133页 |
| 结论 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-149页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第149-151页 |
| 致谢 | 第151-152页 |
| 个人简历 | 第152页 |
