| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-31页 |
| ·烟叶含钾量现状 | 第15-16页 |
| ·植物钾素营养吸收生理的研究状况 | 第16-26页 |
| ·植物钾素吸收机制 | 第16-17页 |
| ·植物钾素吸收与能量供应 | 第17-18页 |
| ·K~+通道 | 第18-21页 |
| ·HKT/TRK 基因 | 第21页 |
| ·KT/HAK/KUP | 第21-22页 |
| ·Na~+/H~+-ATPase | 第22-23页 |
| ·液泡无机焦磷酸酶 | 第23-24页 |
| ·H~+-ATPase | 第24-26页 |
| ·吸钾相关基因的表达与调控 | 第26-28页 |
| ·课题来源、研究内容及研究目的和意义 | 第28-31页 |
| ·课题来源 | 第28-29页 |
| ·课题研究目的 | 第29页 |
| ·课题研究的意义 | 第29页 |
| ·主要研究内容 | 第29-31页 |
| 第2章 材料与方法 | 第31-50页 |
| ·拟南芥吸钾相关基因的克隆与烟草表达 | 第31-41页 |
| ·拟南芥吸钾相关基因的克隆 | 第31-35页 |
| ·酿酒酵母K~+转运基因TRK1 和 TRK2 的敲除 | 第35-37页 |
| ·AtKUP1 基因改组 | 第37页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·烟草转化 | 第38-39页 |
| ·转化子的分子鉴定 | 第39-41页 |
| ·烟叶含钾量的测定 | 第41页 |
| ·黄花烟草吸钾相关基因的克隆与功能分析 | 第41-45页 |
| ·吸钾相关基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·烟草吸钾相关基因的序列分析 | 第42-43页 |
| ·NrHAK1 基因的酵母表达 | 第43-44页 |
| ·黄花烟草 NrHAK1 转录分析 | 第44-45页 |
| ·烟草吸钾基因转录分析 | 第45-50页 |
| ·植物营养相关基因转录分析方法优化 | 第45-46页 |
| ·烟草培养与盐胁迫处理 | 第46页 |
| ·Northern 杂交 | 第46-47页 |
| ·荧光定量 PCR 检测 | 第47-50页 |
| 第3章 拟南芥吸钾基因克隆与烟草转化 | 第50-72页 |
| ·拟南芥AtKUP1 基因的克隆与烟草转化 | 第50-57页 |
| ·拟南芥 AtKUP1 基因的克隆 | 第50页 |
| ·构建 AtKUP1 基因的植物表达载体 | 第50-51页 |
| ·转化子的GUS 染色鉴定 | 第51页 |
| ·转化子的PCR 鉴定 | 第51-52页 |
| ·转化子的Southern 杂交鉴定 | 第52-53页 |
| ·转化材料中AtKup1 基因的转录水平 | 第53-56页 |
| ·转化子烟草内源吸钾相关基因的转录 | 第56页 |
| ·转化材料烟叶主要化学成分 | 第56-57页 |
| ·拟南芥 AtNHX1 基因克隆与烟草转化 | 第57-63页 |
| ·AtNHX1 基因的克隆 | 第57页 |
| ·AtNHX1 基因内部Sac I 酶切位点的消除 | 第57-58页 |
| ·AtNHX1 基因的植物表达双元载体的构建 | 第58-60页 |
| ·转基因烟草的GUS 染色鉴定 | 第60页 |
| ·AtNHX1 转基因烟草的PCR 鉴定 | 第60页 |
| ·转化材料中AtNHX1 基因的转录水平 | 第60-62页 |
| ·烟草K~+ 吸收相关基因的转录分析 | 第62-63页 |
| ·各AtNHX1 烟草转化子烟叶内在化学成分 | 第63页 |
| ·拟南芥AVP2 基因的克隆与烟草转化 | 第63-68页 |
| ·拟南芥AVP2 基因的克隆 | 第63-64页 |
| ·AVP2 基因植物表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·AVP2 转化烟草的分子鉴定 | 第65页 |
| ·转化材料中AVP2 基因的转录水平 | 第65-67页 |
| ·烟草K~+ 吸收相关基因的转录分析 | 第67页 |
| ·转化材料烟叶含钾量的化验分析 | 第67-68页 |
| ·关于拟南芥吸钾基因烟草转化与表达的讨论 | 第68-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 第4章 拟南芥K~+转运蛋白AtKup1 基因DNA改组 | 第72-83页 |
| ·拟南芥AtKUP1 基因的克隆 | 第72页 |
| ·酿酒酵母钾素营养缺陷型 | 第72-75页 |
| ·URA3 基因同源重组转化 | 第72-73页 |
| ·HIS3 基因同源重组转化 | 第73页 |
| ·缺陷型菌株的培养特性 | 第73-74页 |
| ·功能互补鉴定拟南芥K~+载体基因功能 | 第74-75页 |
| ·拟南芥K~+转运蛋白AtKup1 基因DNA改组 | 第75-77页 |
| ·高活性Atkup1 基因的筛选 | 第75-76页 |
| ·AtKUP1 突变基因的功能鉴定 | 第76页 |
| ·AtKUP1 突变基因的核苷酸序列测定 | 第76-77页 |
| ·AtKUP1 突变基因的烟草转化 | 第77页 |
| ·转化材料中AtKUP1 基因的转录分析 | 第77-78页 |
| ·转化材料中烟叶含钾量的化验分析 | 第78-79页 |
| ·关于DNA 分子进化和基因敲除技术的讨论 | 第79-82页 |
| ·本章小结 | 第82-83页 |
| 第5章 烟草吸钾基因的克隆和功能性研究 | 第83-100页 |
| ·NrHAK1 的克隆与功能性研究 | 第83-90页 |
| ·NrHAK1 的克隆 | 第83-84页 |
| ·NrHAK1 蛋白氨基酸序列分析 | 第84页 |
| ·NrHAK1膜蛋白疏水区预测 | 第84-86页 |
| ·NrHAK1膜蛋白的进化树分析 | 第86-87页 |
| ·NrHAK1 在酵母缺陷型的功能补偿 | 第87-88页 |
| ·NrHAK1 基因的特异性表达 | 第88-89页 |
| ·无机盐分与NrHAK1 的转录调控 | 第89-90页 |
| ·黄花烟草钾通道基因 NKC1 的克隆与序列分析 | 第90-96页 |
| ·NKC1 的克隆 | 第90-91页 |
| ·NKC1 蛋白的分子量和氨基酸组成 | 第91-93页 |
| ·钾通道蛋白 NKC1 进化树分析 | 第93页 |
| ·NKC1 二级结构及疏水区预测 | 第93-95页 |
| ·黄花烟草钾通道蛋白NKC1 三维结构预测 | 第95-96页 |
| ·关于烟草吸钾基因克隆与功能研究的讨论 | 第96-99页 |
| ·本章小节 | 第99-100页 |
| 第6章 烟草吸钾相关基因的转录分析 | 第100-119页 |
| ·吸钾基因转录分析方法的优化 | 第100-110页 |
| ·荧光定量 PCR 体系的优化 | 第100-104页 |
| ·qRT-PCR 扩增条件的优化 | 第104-105页 |
| ·看家基因的选择 | 第105-107页 |
| ·标准模板 | 第107-108页 |
| ·qRT-PCR 对基因转录水平的评价 | 第108-110页 |
| ·盐胁迫对吸钾基因转录的影响 | 第110-114页 |
| ·钾通道基因的转录 | 第110-111页 |
| ·钾离子转运体基因的转录 | 第111-112页 |
| ·质子泵基因的转录 | 第112-114页 |
| ·关于K~+吸收相关基因的转录影响因子的讨论 | 第114-118页 |
| ·本章小结 | 第118-119页 |
| 结论 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-135页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 个人简历 | 第138-139页 |
| 符号及缩略词说明 | 第139-140页 |
