| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词 | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-30页 |
| ·猪水肿病的病原学 | 第16-17页 |
| ·猪水肿病的发现 | 第16页 |
| ·产类志贺毒素大肠杆菌的特征 | 第16-17页 |
| ·猪水肿病大肠杆菌的毒力因子 | 第17-24页 |
| ·F18ab菌毛 | 第18-20页 |
| ·类志贺毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe) | 第20-24页 |
| ·猪水肿病的诊断 | 第24-26页 |
| ·猪水肿病的流行病学 | 第24-25页 |
| ·临床症状及剖检病变 | 第25页 |
| ·实验室诊断方法 | 第25-26页 |
| ·猪水肿病的免疫研究 | 第26-30页 |
| ·药物预防 | 第26-27页 |
| ·菌体灭活苗 | 第27页 |
| ·亚单位苗 | 第27-30页 |
| 第2章 F18~+ E.coli的分离鉴定 | 第30-50页 |
| 前言 | 第30-31页 |
| 技术路线 | 第31-32页 |
| 1 材料与方法 | 第32-39页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·引物的设计及合成 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·病原分离 | 第33页 |
| ·生化鉴定 | 第33页 |
| ·血清型鉴定 | 第33-34页 |
| ·耐药性检测 | 第34页 |
| ·菌毛F18的PCR检测 | 第34-35页 |
| ·Ee株的主要毒力因子的克隆与序列分析 | 第35-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-48页 |
| ·细菌分离与鉴定 | 第39-41页 |
| ·细菌分离与生化鉴定 | 第39-40页 |
| ·F18~+ E.coli的检出与血清定型 | 第40-41页 |
| ·耐药性检测 | 第41-42页 |
| ·Ee株的主要毒力因子的克隆与序列分析 | 第42-48页 |
| 4 小结及讨论 | 第48-50页 |
| ·F18~+E. coli血清型定型 | 第48页 |
| ·药敏试验 | 第48-49页 |
| ·序列分析 | 第49-50页 |
| 第3章 F18~+ E.coli的血清流行病学调查 | 第50-67页 |
| 前言 | 第50-52页 |
| 技术路线 | 第52-53页 |
| 1 实验材料 | 第53-54页 |
| ·菌种与质粒 | 第53页 |
| ·血清 | 第53页 |
| ·主要药品及试剂 | 第53页 |
| ·主要培养基 | 第53页 |
| ·酶及试剂盒 | 第53页 |
| ·质粒抽提与鉴定试剂 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE试剂 | 第54页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第54页 |
| ·试验动物 | 第54页 |
| 2 试验方法 | 第54-58页 |
| ·FedF蛋白的表达与纯化 | 第54-56页 |
| ·ELISA试验条件的确定 | 第56-57页 |
| ·最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定(方阵滴定) | 第56页 |
| ·ELISA的操作步骤 | 第56页 |
| ·ELISA阴阳界限的确定 | 第56-57页 |
| ·ELISA方法的重复性试验 | 第57页 |
| ·ELISA的临床应用 | 第57-58页 |
| ·FedF-ELISA的血清学调查 | 第57-58页 |
| ·FedF-ELISA与细菌分离鉴定的比较 | 第58页 |
| ·统计学方法 | 第58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-64页 |
| ·FedF-ELISA检测方法的建立 | 第58-62页 |
| ·FedF表达条件的优化 | 第58-60页 |
| ·抗原包被浓度与血清最佳稀释度的选择 | 第60页 |
| ·ELISA结果判定标准的确定 | 第60页 |
| ·FedF-ELISA特异性和敏感性 | 第60-62页 |
| ·FedF-ELISA的临床应用 | 第62-64页 |
| 4 讨论与结论 | 第64-67页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| ·FedF-ELISA检测方法的建立 | 第64-65页 |
| ·血清流行病学调查 | 第65-66页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| 第4章 水肿毒素B亚单位与F18菌毛黏附素FedF的融合表达及免疫原性研究 | 第67-91页 |
| 前言 | 第67-69页 |
| 技术路线 | 第69-70页 |
| 1 材料与方法 | 第70-75页 |
| ·菌株、血清及细胞 | 第70页 |
| ·酶及主要试剂 | 第70页 |
| ·Western-blot试剂 | 第70页 |
| ·融合基因的克隆 | 第70-71页 |
| ·引物设计 | 第70-71页 |
| ·PCR扩增 | 第71页 |
| ·重组表达质粒的构建及序列测定 | 第71-72页 |
| ·重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE电泳 | 第72页 |
| ·Western-blotting | 第72-73页 |
| ·融合蛋白抗血清的制备 | 第73-74页 |
| ·抗血清的体外活性试验 | 第74-75页 |
| ·抗血清对SLT-Ⅱe的细胞毒性中和试验 | 第74页 |
| ·黏附试验及抗血清黏附抑制试验 | 第74-75页 |
| ·表达蛋白对小鼠的免疫原性 | 第75页 |
| 2 结果 | 第75-88页 |
| ·重组质粒pKSF的构建及序列测定 | 第76页 |
| ·融合基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第76-81页 |
| ·GST-SF的表达及检测 | 第81-82页 |
| ·表达产物抗血清体外活性试验 | 第82-84页 |
| ·表达产物抗血清的体外细胞毒性抑制试验 | 第82-83页 |
| ·菌毛黏附及黏附抑制实验 | 第83-84页 |
| ·融合蛋白对小鼠的免疫原性试验 | 第84-88页 |
| ·小鼠抗体消长情况 | 第84-86页 |
| ·免疫保护性试验结果 | 第86-88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| 4 结论 | 第90-91页 |
| 第5章 猪水肿病新型基因工程类毒素菌苗对小鼠及猪免疫效力的研究 | 第91-110页 |
| 前言 | 第91-92页 |
| 技术路线 | 第92-93页 |
| 1 材料与方法 | 第93-97页 |
| ·材料 | 第93页 |
| ·菌株 | 第93页 |
| ·主要试剂 | 第93页 |
| ·试验动物 | 第93页 |
| ·方法 | 第93-97页 |
| ·GST-SF在BL-21中的诱导表达及纯化 | 第93页 |
| ·细菌的平板菌落计数 | 第93-94页 |
| ·油乳剂亚单位菌苗的制备 | 第94页 |
| ·病理切片的制作 | 第94-95页 |
| ·抗体的检测 | 第95页 |
| ·攻毒剂量的确定 | 第95页 |
| ·亚单位菌苗的安全性试验 | 第95-96页 |
| ·亚单位菌苗对小鼠及仔猪效力的观测 | 第96页 |
| ·攻毒后血清中生化指标的检测 | 第96-97页 |
| ·攻毒后日增重测定 | 第97页 |
| ·攻毒后剖检病理学及组织病理学观察 | 第97页 |
| ·肾小管的组织病理学积分 | 第97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-105页 |
| ·GST-SF蛋白的提取与纯化 | 第97-98页 |
| ·亚单位菌苗对怀孕母猪的安全性试验 | 第98页 |
| ·小鼠及仔猪抗体水平的检测 | 第98-102页 |
| ·小鼠抗体水平的检测 | 第98-100页 |
| ·仔猪抗体水平的检测 | 第100-102页 |
| ·仔猪攻毒后的体温变化及临床表现情况 | 第102页 |
| ·攻毒后的保护效力 | 第102-103页 |
| ·对小鼠的保护力 | 第102-103页 |
| ·对仔猪的保护力 | 第103页 |
| ·仔猪攻毒后的生化指标 | 第103-104页 |
| ·仔猪日增重的测定 | 第104页 |
| ·攻毒后的典型病理变化 | 第104页 |
| ·病理组织学变化 | 第104-105页 |
| ·肾小管的组织病理学积分 | 第105页 |
| 4 讨论 | 第105-109页 |
| ·猪水肿病灭活苗 | 第105-106页 |
| ·猪水肿病亚单位菌苗 | 第106-107页 |
| ·血清生理、生化指标 | 第107-108页 |
| ·病理学检验 | 第108-109页 |
| 5 结论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-121页 |
| 附录 | 第121-129页 |
