| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 插图和附表清单 | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.植物几丁质酶的特性 | 第10-12页 |
| ·生化分子特性 | 第10页 |
| ·植物几丁质酶基因的表达与调控特性 | 第10-12页 |
| 2.植物几丁质酶的氨基酸结构及其分类 | 第12-14页 |
| ·植物几丁质酶的氨基酸结构 | 第12页 |
| ·植物几丁质酶的分类 | 第12-14页 |
| 3.几丁质酶的基因结构 | 第14页 |
| 4.几丁质酶的分子进化 | 第14-15页 |
| 5.几丁质酶的生物学作用 | 第15-17页 |
| 6.几丁质酶基因工程研究进展 | 第17-20页 |
| 引言 | 第20-23页 |
| 材料和方法 | 第23-38页 |
| 1.试验材料 | 第23页 |
| 2.仪器设备和试剂 | 第23页 |
| 3.试验方法 | 第23-38页 |
| ·大白菜基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·PCR及RT-PCR扩增用引物 | 第24页 |
| ·大白菜几丁质酶基因特异片段的PCR扩增 | 第24-28页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第25页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体连接 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞制备、转化及重组子的鉴定 | 第26-28页 |
| ·5′端150bp的PCR扩增 | 第28页 |
| ·大白菜几丁质酶的诱导及酶活的测定 | 第28-29页 |
| ·大白菜几丁质酶基因的3′ RACE反应 | 第29-31页 |
| ·大白菜几丁质酶基因的5′ RACE技术 | 第31-32页 |
| ·几丁质酶全基因的PCR及RT-PCR反应 | 第32-33页 |
| ·几丁质酶的原核表达 | 第33-38页 |
| ·表达载体pET-CHB4的构建 | 第33-34页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第34-36页 |
| ·表达蛋白对真菌的抑制试验 | 第36页 |
| ·几丁质酶活力的测定 | 第36-38页 |
| 结果与分析 | 第38-52页 |
| 1.大白菜基因组DNA的提取 | 第38页 |
| 2.大白菜几丁质酶基因特异片段的PCR扩增及酶切验证 | 第38-39页 |
| 3.大白菜几丁质酶基因5’端的PCR扩增及酶切验证 | 第39页 |
| 4.大白菜几丁质酶的诱导及酶活的测定 | 第39-40页 |
| 5.检测内含子的PCR和RT-PCR反应 | 第40页 |
| 6.大白菜几丁质酶基因的3′ RACE反应 | 第40-41页 |
| 7.大白菜几丁质酶基因的5′ RACE技术 | 第41-42页 |
| 8.几丁质酶全基因的PCR及RT-PCR反应 | 第42页 |
| 9.大白菜几丁质酶基因的序列分析及其氨基酸序列的多重比较 | 第42-45页 |
| 10.大白菜几丁质酶基因CHB4的诱导表达及蛋白SDS-PAGE分析 | 第45-52页 |
| ·外源基因表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第45-46页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第46-49页 |
| ·IPTG的浓度 | 第46-47页 |
| ·低温诱导(25℃) | 第47-48页 |
| ·培养基的不同PH值对诱导表达产物的影响 | 第48-49页 |
| ·表达蛋白对真菌的抑制效果 | 第49-50页 |
| ·几丁质酶活力的测定 | 第50-52页 |
| ·NAG标准曲线的绘制 | 第50-51页 |
| ·几丁质酶活力的测定 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
