| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-25页 |
| 1 D-对羟基苯甘氨酸的性质特征 | 第10页 |
| 2 D-对羟基苯甘氨酸的合成 | 第10-14页 |
| ·对羟基扁桃酸法 | 第10页 |
| ·乙醛酸法 | 第10-13页 |
| ·生物酶法 | 第13-14页 |
| 3 微生物酶法制备D-对羟基苯甘氨酸的研究进展 | 第14-19页 |
| ·单酶法 | 第14页 |
| ·双酶法 | 第14-15页 |
| ·一菌多酶法 | 第15-16页 |
| ·生物酶的获得――菌株的选育 | 第16-19页 |
| 4 D-对羟基苯甘氨酸市场情况 | 第19-21页 |
| 参考文献 | 第21-25页 |
| 第二章 D-乙内酰脲酶基因(dha)的克隆、测序及表达 | 第25-39页 |
| 1 引言 | 第25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-27页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第25-26页 |
| ·试剂和工具酶 | 第26页 |
| ·培养基及培养条件 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·细菌学鉴定方法 | 第26页 |
| ·分子生物学方法 | 第26页 |
| ·酶活测定方法 | 第26-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-35页 |
| ·MMR003 菌株的细菌学分类鉴定 | 第27页 |
| ·MMR003D-乙内酰脲酶基因的克隆 | 第27-35页 |
| ·基因杂交探针的选择 | 第27页 |
| ·MMR003 中目标基因片断的克隆 | 第27-29页 |
| ·MMR003D-乙内酰脲酶的DNA 序列 | 第29-35页 |
| ·MMR003D-乙内酰脲酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-39页 |
| 第三章 D-乙内酰脲酶(dha)和N-脱氨甲基酶(dca)在大肠杆菌中的共表达 | 第39-48页 |
| 1 引言 | 第39页 |
| 2 材料和方法 | 第39-41页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第39-40页 |
| ·试剂和工具酶 | 第40页 |
| ·培养基和培养条件 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-41页 |
| ·分子生物学方法 | 第40页 |
| ·菌种构建 | 第40-41页 |
| ·酶活测定方法 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-44页 |
| ·摇瓶发酵培养基的选择及最适发酵条件 | 第41-43页 |
| ·连续转化实验验证共表达的活力 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 第四章 基因工程大肠杆菌MMFY01 中试实验 | 第48-62页 |
| 1 引言 | 第48-50页 |
| 2 材料和方法 | 第50-51页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·菌株 | 第50页 |
| ·试剂和仪器 | 第50页 |
| ·培养基及培养条件 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51页 |
| ·菌浓测定方法 | 第51页 |
| ·酶活测定方法 | 第51页 |
| ·工程菌MMFY01 种子液的制备方法 | 第51页 |
| ·野生型假单孢菌、基因工程假单孢菌种子液制备方法 | 第51页 |
| 3 实验结果 | 第51-59页 |
| ·基因工程菌MMFY01 发酵结果 | 第51-53页 |
| ·野生型假单孢菌和基因重组假单孢菌发酵结果 | 第53-54页 |
| ·工业替代培养基摇瓶实验结果 | 第54-58页 |
| ·转化实验结果 | 第58-59页 |
| ·10L转化罐转化实验 | 第58-59页 |
| ·摇瓶转化实验 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 第五章 结论 | 第62-63页 |
| 附注 | 第63-64页 |
| 版权声明 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
