| 第一章 文献综述 | 第1-56页 |
| 1. 前言 | 第14-15页 |
| 2. 鱼类免疫因子的分子生物学研究进展 | 第15-29页 |
| ·趋化因子 | 第15-17页 |
| ·细胞因子 | 第17-21页 |
| ·急性时相反应蛋白(acute phase proteins, APPs) | 第21-23页 |
| ·补体系统(complement system) | 第23-24页 |
| ·天然抗体(Natural antibodies) | 第24-25页 |
| ·Toll 信号通路介导的非特性免疫(参考文献待定) | 第25-27页 |
| ·自身识别相关受体 | 第27-29页 |
| 3. 本研究的目的、意义及实验设计 | 第29-56页 |
| 第二章 大菱鲆弹状病毒诱导鱼类培养细胞的凋亡 | 第56-72页 |
| 1. 前言 | 第56-57页 |
| 2. 材料与方法 | 第57-59页 |
| ·细胞、细胞培养基及细胞培养 | 第57页 |
| ·病毒、病毒感染及病毒滴度测定 | 第57-58页 |
| ·SMRV 病毒的紫外线灭活 | 第58页 |
| ·培养细胞的荧光染色 | 第58页 |
| ·电子显微镜制样及观察 | 第58-59页 |
| ·细胞核酸的提取和琼脂糖凝胶电泳 | 第59页 |
| ·流式细胞术 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-68页 |
| ·感染前后CLC 细胞发生显著的形态学变化 | 第59-63页 |
| ·病毒感染的CLC 细胞中出现典型的 DNA 梯形带 | 第63-64页 |
| ·流式细胞术显示了感染SMRV 的CLC 细胞中凋亡的存在 | 第64-66页 |
| ·SMRV 病毒感染不同时间的 CLC 细胞中凋亡细胞含量与及病毒滴度的变化关系 | 第66-67页 |
| ·灭活的SMRV 病毒不能诱导CLC 细胞发生凋亡 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| 第三章 灭活病毒诱导牙鲆传代细胞差减cDNA 文库的构建及评价 | 第72-89页 |
| 1. 前言 | 第72页 |
| 2 材料与方法 | 第72-80页 |
| ·细胞与病毒 | 第73页 |
| ·病毒灭活及细胞诱导处理 | 第73页 |
| ·牙鲆细胞总RNA 提取 | 第73-74页 |
| ·诱导组和对照组mRNA 的纯化 | 第74-75页 |
| ·差减cDNA 文库的建立 | 第75-78页 |
| ·Tester cDNA 的接头连接效率和抗病毒基因差减文库的差减效率的检测 | 第78-79页 |
| ·差减cDNA 质粒文库的构建 | 第79-80页 |
| 3 结果与分析 | 第80-86页 |
| ·牙鲆细胞总RNA 及mRNA 质量评价 | 第80页 |
| ·双链cDNA 合成和 RsaⅠ酶切效率 | 第80页 |
| ·两次抑止性PCR 产物 | 第80-85页 |
| ·双链cDNA 接头连接效率 | 第85页 |
| ·差减效率 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-89页 |
| 第四章 差减cDNA 文库的筛选及ESTs 分析鉴定 | 第89-105页 |
| 1. 前言 | 第89-91页 |
| 2 材料与方法 | 第91-93页 |
| ·差减cDNA 质粒文库克隆的PCR 筛选筛选 | 第91页 |
| ·斑点杂交筛选 | 第91-92页 |
| ·序列测定、序列分析及功能注释 | 第92-93页 |
| 3 结果与分析 | 第93-100页 |
| ·差减cDNA 文库容量及文库中插入片段大小 | 第93页 |
| ·斑点杂交 | 第93页 |
| ·差减cDNA 片断的序列测定和分析 | 第93-100页 |
| 4 讨论 | 第100-105页 |
| 第五章 抗病毒及免疫相关基因全长cDNA 的克隆及序列分析 | 第105-181页 |
| 第一节 牙鲆CC 型趋化因子的克隆鉴定和序列分析 | 第105-118页 |
| 1. 前言 | 第105-106页 |
| 2. 材料和方法 | 第106-109页 |
| ·SMART cDNA 的合成 | 第106-107页 |
| ·质粒文库的构建及序列测定 | 第107页 |
| ·序列同源性、多序列对位分析及遗传进化树的绘制 | 第107-109页 |
| 3. 实验结果 | 第109-116页 |
| ·牙鲆趋化因子FE-CCL19 cDNA 全序列及其推导的氨基酸序列 | 第109-110页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第110页 |
| ·多序列对比及遗传进化树的绘制 | 第110-116页 |
| 4. 讨论 | 第116-118页 |
| 第二节 核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinases,NDPK)克隆鉴定和表达分析 | 第118-130页 |
| 1. 前言 | 第118-119页 |
| 2. 材料方法 | 第119-120页 |
| ·RACE-PCR 扩增FE-NDPK 基因全长cDNA 序列 | 第119页 |
| ·序列同源性、多序列对位分析及遗传进化树的绘制 | 第119页 |
| ·组织RNA 的提取以及利用RT-PCR 进行 FE-NDPK 组织特异性表达分析 | 第119-120页 |
| 3. 结果与分析 | 第120-127页 |
| ·cDNA 全序列及其推导的氨基酸序列 | 第120-124页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第124页 |
| ·多序列对比及遗传进化树的绘制 | 第124页 |
| ·正常牙鲆各种组织中 FE-NDPK mRNA 转录水平的定量分析 | 第124-127页 |
| 4. 讨论 | 第127-130页 |
| 第三节 活化型蛋白激酶 C 受体克隆鉴定和表达分析 | 第130-140页 |
| 1. 前言 | 第130-131页 |
| 2. 材料和方法 | 第131-132页 |
| ·RACE-PCR 扩增FE-RACK1 基因全长cDNA 序列 | 第131页 |
| ·序列同源性、多序列对位分析及遗传进化树的绘制 | 第131页 |
| ·组织RNA 的提取和 RT-PCR 进行表达分析 | 第131-132页 |
| 3 结果与讨论 | 第132-140页 |
| ·cDNA 全序列及其推导的氨基酸序列 | 第133页 |
| ·蛋白序列分析 | 第133页 |
| ·多序列对比及遗传进化树的绘制 | 第133-136页 |
| ·RACK 基因在牙鲆不同组织中的分布差异 | 第136-140页 |
| 第四节 一个新的半胱氨酸蛋白酶基因的cDNA 克隆和序列分析 | 第140-157页 |
| 1. 前言 | 第140-142页 |
| 2. 材料和方法 | 第142页 |
| ·RACE-PCR 扩增FE-26/29kD 基因全长cDNA 序列 | 第142页 |
| ·序列同源性、多序列对位分析及遗传进化树的绘制 | 第142页 |
| ·组织RNA 的提取以及利用RT-PCR 进行 FE-26 | 第142页 |
| 3. 实验结果 | 第142-152页 |
| ·FE-26/29kD 基因全长cDNA 序列及推导的氨基酸序列 | 第143-145页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第145页 |
| ·多序列对比及遗传进化树的绘制 | 第145-151页 |
| ·正常牙鲆各种组织中 FE-26/29kD 基因mRNA 转录水平的定量分析 | 第151-152页 |
| 4. 讨论 | 第152-157页 |
| 第五节 decorin 基因全长的cDNA 的克隆、序列分析、组织定位以及其在细菌和牙鲆细胞中的重组表达 | 第157-181页 |
| 1. 前言 | 第157-159页 |
| 2. 材料和方法 | 第159-164页 |
| ·RACE-PCR 扩增FE-DCN 基因全长cDNA 序列 | 第159页 |
| ·序列同源性、多序列对位分析及遗传进化树的绘制 | 第159页 |
| ·组织RNA 的提取以及利用RT-PCR 进行 FE-NDPK 组织特异性表达分析 | 第159页 |
| ·细胞RNA 的提取以及利用 RT-PCR 进行FE-NDPK 在灭活病毒处理的 FE 细胞中的表达时序分析 | 第159-160页 |
| ·FE-DCN 基因原核表达载体的构建及其在细菌中的诱导表达 | 第160-162页 |
| ·FE-DCN 基因多克隆抗体的制备 | 第162页 |
| ·westernblot blot 进行组织定量分析 | 第162-163页 |
| ·FE-DCN 基因真核表达载体的构建以及在FE 细胞中瞬时表达 | 第163-164页 |
| 3. 实验结果 | 第164-167页 |
| ·FE-DCN 基因全长cDNA 的克隆 | 第164页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第164-165页 |
| ·RT-PCR 分析 FE-DCN 基因在牙鲆不同组织中的分布情况 | 第165页 |
| ·灭活SMRV 处理的牙鲆 FE 细胞中的FE-DCN 表达时序分析 | 第165页 |
| ·FE-DCN 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第165页 |
| ·利用western blot 对牙鲆 FE-DCN 表达产物进行组织分布分析 | 第165-166页 |
| ·FE-DCN 基因在牙鲆培养细胞中的瞬时表达 | 第166-167页 |
| 4. 讨论 | 第167-181页 |
| 参考文献 | 第181-228页 |
| 总结 | 第228-229页 |
