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分别作用于hTERT和ATP6L的RNA干扰对肝癌细胞生长和转移的抑制作用

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-12页
第一部分 RNAi的发展与应用第12-44页
 1 引言第14页
 2 RNAi的发展第14-16页
 3 RNAi的机制第16-20页
   ·Dicer是RNAi的启动因子第16-17页
   ·RISC是RNAi的效应因子第17-18页
   ·RdRPs为RNAi扩大效应所必需第18页
   ·一些膜蛋白参与系统RNAi(systematic RNAi)第18页
   ·miRNA诱导内在的RNAi通路第18-20页
 4 RNAi在肿瘤转移研究中的应用第20-23页
 5 RNAi在其它领域的应用及发展前景第23-24页
   ·RNAi在肿瘤研究其它方面的应用第23页
   ·RNAi用于高通量的基因功能研究第23-24页
   ·RNAi用于应用揭示基本生命现象的机制第24页
   ·RNAi技术的发展趋势及应用局限第24页
 6 RNAi技术在哺乳动物系统中的应用第24-29页
   ·siRNA的设计第25-26页
   ·siRNA的生成第26-28页
   ·siRNA的导入或表达第28-29页
   ·RANi效应的检测第29页
   ·RNAi技术的网上资源第29页
 7 RNAi的应用实例第29-34页
   ·材料第30页
   ·方法第30-34页
 8 参考文献第34-44页
第二部分 hTERT RNAi对肝癌细胞端粒酶的抑制第44-66页
 1 引言第46页
 2 材料和方法第46-47页
   ·转染第46页
   ·hTERT蛋白表达(western blot)第46-47页
   ·端粒酶活性的检测第47页
   ·转化细胞的生长曲线测定第47页
 3 结果第47-50页
   ·si-T-PSG质粒在HCCLM3中表达第47-48页
   ·si-T-PU6质粒对hTERT有抑制作用第48-49页
   ·si-T-PU6质粒抑制端粒酶活性第49页
   ·si-T-M3细胞生长受抑制第49-50页
 4 讨论第50-58页
   ·端粒和端粒酶第50-54页
   ·端粒酶与肿瘤第54-57页
   ·问题和展望第57-58页
 5 参考文献第58-66页
第三部分 ATP6L对肝癌细胞转移和生长的抑制第66-99页
 1 引言第68-69页
 2 材料和方法第69-75页
   ·细胞培养和载体构建第69-70页
   ·转染第70页
   ·RNA抽提、RT-PCR及Northern blot第70页
   ·体外侵袭实验第70-71页
   ·V-ATPase功能检测第71-73页
   ·MMP-2表达及MMP-2/9活性检测第73-74页
   ·肿瘤移植模型第74页
   ·统计学处理第74-75页
 3 结果第75-80页
   ·si-A-M3中ATP6L表达受抑制第75页
   ·si-A-M3体外侵袭力的抑制第75-76页
   ·si-A-M3细胞V-ATPase功能的抑制第76-77页
   ·si-A-M3细胞中MMP-2/9的下调第77-78页
   ·种植于小鼠肝脏的si-A-M3细胞生长受到抑制第78-79页
   ·种植于小鼠肝脏si-A-M3细胞肝内转移和肺转移均受到抑制第79-80页
 4 讨论第80-91页
   ·肿瘤细胞的泌酸增强——"Warburg效应"第80-83页
   ·肿瘤细胞泌酸的重要机制——V-ATPase第83-90页
   ·结语——抑制泌酸是抑制肿瘤的有效途径第90-91页
 5 参考文献第91-99页
在读期间发表的主要论文目录第99-100页
致谢第100页

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