摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-12页 |
第一部分 RNAi的发展与应用 | 第12-44页 |
1 引言 | 第14页 |
2 RNAi的发展 | 第14-16页 |
3 RNAi的机制 | 第16-20页 |
·Dicer是RNAi的启动因子 | 第16-17页 |
·RISC是RNAi的效应因子 | 第17-18页 |
·RdRPs为RNAi扩大效应所必需 | 第18页 |
·一些膜蛋白参与系统RNAi(systematic RNAi) | 第18页 |
·miRNA诱导内在的RNAi通路 | 第18-20页 |
4 RNAi在肿瘤转移研究中的应用 | 第20-23页 |
5 RNAi在其它领域的应用及发展前景 | 第23-24页 |
·RNAi在肿瘤研究其它方面的应用 | 第23页 |
·RNAi用于高通量的基因功能研究 | 第23-24页 |
·RNAi用于应用揭示基本生命现象的机制 | 第24页 |
·RNAi技术的发展趋势及应用局限 | 第24页 |
6 RNAi技术在哺乳动物系统中的应用 | 第24-29页 |
·siRNA的设计 | 第25-26页 |
·siRNA的生成 | 第26-28页 |
·siRNA的导入或表达 | 第28-29页 |
·RANi效应的检测 | 第29页 |
·RNAi技术的网上资源 | 第29页 |
7 RNAi的应用实例 | 第29-34页 |
·材料 | 第30页 |
·方法 | 第30-34页 |
8 参考文献 | 第34-44页 |
第二部分 hTERT RNAi对肝癌细胞端粒酶的抑制 | 第44-66页 |
1 引言 | 第46页 |
2 材料和方法 | 第46-47页 |
·转染 | 第46页 |
·hTERT蛋白表达(western blot) | 第46-47页 |
·端粒酶活性的检测 | 第47页 |
·转化细胞的生长曲线测定 | 第47页 |
3 结果 | 第47-50页 |
·si-T-PSG质粒在HCCLM3中表达 | 第47-48页 |
·si-T-PU6质粒对hTERT有抑制作用 | 第48-49页 |
·si-T-PU6质粒抑制端粒酶活性 | 第49页 |
·si-T-M3细胞生长受抑制 | 第49-50页 |
4 讨论 | 第50-58页 |
·端粒和端粒酶 | 第50-54页 |
·端粒酶与肿瘤 | 第54-57页 |
·问题和展望 | 第57-58页 |
5 参考文献 | 第58-66页 |
第三部分 ATP6L对肝癌细胞转移和生长的抑制 | 第66-99页 |
1 引言 | 第68-69页 |
2 材料和方法 | 第69-75页 |
·细胞培养和载体构建 | 第69-70页 |
·转染 | 第70页 |
·RNA抽提、RT-PCR及Northern blot | 第70页 |
·体外侵袭实验 | 第70-71页 |
·V-ATPase功能检测 | 第71-73页 |
·MMP-2表达及MMP-2/9活性检测 | 第73-74页 |
·肿瘤移植模型 | 第74页 |
·统计学处理 | 第74-75页 |
3 结果 | 第75-80页 |
·si-A-M3中ATP6L表达受抑制 | 第75页 |
·si-A-M3体外侵袭力的抑制 | 第75-76页 |
·si-A-M3细胞V-ATPase功能的抑制 | 第76-77页 |
·si-A-M3细胞中MMP-2/9的下调 | 第77-78页 |
·种植于小鼠肝脏的si-A-M3细胞生长受到抑制 | 第78-79页 |
·种植于小鼠肝脏si-A-M3细胞肝内转移和肺转移均受到抑制 | 第79-80页 |
4 讨论 | 第80-91页 |
·肿瘤细胞的泌酸增强——"Warburg效应" | 第80-83页 |
·肿瘤细胞泌酸的重要机制——V-ATPase | 第83-90页 |
·结语——抑制泌酸是抑制肿瘤的有效途径 | 第90-91页 |
5 参考文献 | 第91-99页 |
在读期间发表的主要论文目录 | 第99-100页 |
致谢 | 第100页 |