| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| ·人胃泌素概况 | 第10-13页 |
| ·胃泌素的合成 | 第10-11页 |
| ·胃泌素的生物活性 | 第11-12页 |
| ·胃泌素的作用方式 | 第12-13页 |
| ·胃泌素与胃肠道肿瘤的关系 | 第13-15页 |
| ·肿瘤细胞中胃泌素基因的表达 | 第13-14页 |
| ·胃泌素在恶性肿瘤中的作用机制 | 第14-15页 |
| ·胃肠道肿瘤抗胃泌素治疗的研究进展 | 第15-19页 |
| ·胃泌素分泌抑制 | 第15-16页 |
| ·胃泌素受体拮抗 | 第16页 |
| ·反义寡核苷酸抑制 | 第16-17页 |
| ·抗胃泌素抗体治疗 | 第17-19页 |
| ·人胃泌素G17疫苗靶位的选择 | 第19-20页 |
| ·P64K蛋白的性质 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-27页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·菌株 | 第21页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·抗体 | 第21页 |
| ·细胞及实验动物 | 第21页 |
| ·限制性内切酶及工具酶 | 第21-22页 |
| ·DNA和质粒回收试剂盒 | 第22页 |
| ·核酸及蛋白分子量标准 | 第22页 |
| ·所有合成的引物 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·主要溶液 | 第25-27页 |
| 第三章 实验步骤 | 第27-42页 |
| ·目的基因的克隆 | 第27-30页 |
| ·脑膜炎球菌P6K基因的克隆 | 第27页 |
| ·去掉终止密码子的P64K’基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·P64KHis_6基因的克隆 | 第28页 |
| ·P64KZtag基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·G17P64K融合蛋白基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·P64K蛋白表达载体pET28a-P64K的构建 | 第30-31页 |
| ·去掉终止密码子的P64K蛋白表达载体pET28a-P64K’的构建 | 第31-32页 |
| ·P64KHis_6蛋白表达载体pET28a-P64KHis_6的构建 | 第32页 |
| ·P64KZtag蛋白表达载体pET28a-P64KZtag的构建 | 第32-33页 |
| ·G17P64K融合蛋白表达载体pET28a-G17P64K的构建 | 第33页 |
| ·表达载体转化表达菌株及蛋白的表达筛选 | 第33页 |
| ·表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞 | 第33页 |
| ·蛋白的表达筛选 | 第33页 |
| ·蛋白的纯化 | 第33-36页 |
| ·蛋白的表达方式和表达水平的确定 | 第33-34页 |
| ·蛋白样品的硫酸铵沉淀 | 第34页 |
| ·蛋白样品的Butyl疏水层析 | 第34页 |
| ·蛋白样品的分子筛层析 | 第34页 |
| ·蛋白样品的Q柱阴离子层析 | 第34-35页 |
| ·蛋白样品的Ni柱亲和层析 | 第35页 |
| ·蛋白样品的S柱阳离子层析 | 第35页 |
| ·蛋白的N端氨基酸测序 | 第35页 |
| ·用Lowry法测定样品的蛋白浓度 | 第35-36页 |
| ·工程菌5L生物反应器培养 | 第36页 |
| ·G17多肽的化学合成 | 第36页 |
| ·合成多肽与载体蛋白P64K及DT的交联 | 第36-37页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体的制备与纯化 | 第37-40页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体的制备 | 第37-38页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体滴度的测定 | 第38-39页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体的纯化 | 第39-40页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体的体外活性评价 | 第40-41页 |
| ·SW480细胞的培养 | 第40页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体的体外活性评价 | 第40-41页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体的体内活性评价 | 第41-42页 |
| 第四章 实验结果 | 第42-65页 |
| ·目的基因的克隆 | 第42-44页 |
| ·P6K基因的克隆 | 第42页 |
| ·去掉终止密码子的P64K’基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·P64KHis_6基因的克隆 | 第43页 |
| ·P64KZtag基因的克隆 | 第43页 |
| ·G17P64K融合蛋白基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第44-50页 |
| ·P64K基因表达载体的构建与酶切鉴定及序列分析 | 第44-48页 |
| ·去掉终止密码子的P64K’基因表达载体的构建与酶切鉴定及序列分析 | 第48页 |
| ·P64KHis_6基因表达载体的构建与酶切鉴定及序列分析 | 第48-49页 |
| ·P64KZtag基因表达载体的构建与酶切鉴定及序列分析 | 第49页 |
| ·G17P64K基因表达载体的构建与酶切鉴定及序列分析 | 第49-50页 |
| ·表达载体转化表达菌株及表达筛选 | 第50-53页 |
| ·pET28a-P64K表达载体转化表达菌株及表达筛选 | 第50-51页 |
| ·pET28a-P64KHis6表达载体转化表达菌株及表达筛选 | 第51页 |
| ·pET28a-P64KZtag表达载体转化表达菌株及表达筛选 | 第51-52页 |
| ·pET28a-G17P64K表达载体转化表达菌株及表达筛选 | 第52-53页 |
| ·蛋白的纯化 | 第53-58页 |
| ·蛋白表达方式和表达水平的确定 | 第53-55页 |
| ·蛋白的硫酸铵沉淀 | 第55-56页 |
| ·P64KHis_6蛋白Ni柱亲和层析 | 第56页 |
| ·P64KZtag融合蛋白S柱阳离子层析 | 第56-57页 |
| ·蛋白的纯化 | 第57页 |
| ·蛋白的N端氨基酸测序 | 第57-58页 |
| ·工程菌5L生物反应器培养 | 第58-60页 |
| ·G17多肽的化学合成 | 第60-61页 |
| ·合成多肽与载体蛋白P64K及DT的化学交联 | 第61页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体的制备与纯化 | 第61-62页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体抗体滴度的测定 | 第61页 |
| ·兔抗胃泌素G17抗体抗体的纯化 | 第61-62页 |
| ·兔抗胃泌素G17血清抗体体外活性评价 | 第62-63页 |
| ·兔抗胃泌素G17血清抗体体内活性评价 | 第63-65页 |
| 第五章 讨论 | 第65-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 发表文章 | 第75-84页 |
