| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-29页 |
| ·中性蛋白酶研究概况 | 第12-22页 |
| ·微生物蛋白酶 | 第12-13页 |
| ·蛋白酶的分类 | 第13-15页 |
| ·蛋白酶的催化机制 | 第15-16页 |
| ·丝氨酸蛋白酶 | 第15页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶 | 第15-16页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶 | 第16页 |
| ·金属蛋白酶 | 第16页 |
| ·中性蛋白酶的国内外研究现状和发展趋势 | 第16-19页 |
| ·中性蛋白酶的应用 | 第19-22页 |
| ·中性蛋白酶在皮革工业中的应用 | 第19-20页 |
| ·中性蛋白酶在食品工业中的应用 | 第20-21页 |
| ·中性蛋白酶在日用化工中的应用 | 第21页 |
| ·中性蛋白酶在医药中的应用 | 第21页 |
| ·中性蛋白酶的其它用途 | 第21-22页 |
| ·研究目的和意义 | 第22页 |
| ·研究内容 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-29页 |
| 第二章 枯草芽孢杆菌中性蛋白酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 | 第29-53页 |
| ·材料和方法 | 第29-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-46页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第38页 |
| ·PCR克隆中性蛋白酶全长基因片段 | 第38-39页 |
| ·PCR克隆中性蛋白酶功能区基因片段 | 第39-40页 |
| ·重组酵母表达载体pPIC9K-NPL和pPIC9K-NPS的构建 | 第40-42页 |
| ·重组酵母表达载体pPIC9K-NPL和pPIC9K-NPS转化酵母SMD1168及阳性转化子的筛选 | 第42-43页 |
| ·转化子的酶活测定及高产菌株的筛选 | 第43-44页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第44-46页 |
| ·转化子遗传稳定性实验 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| ·小结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 第三章 重组毕赤酵母发酵条件的优化 | 第53-71页 |
| ·材料与方法 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-66页 |
| ·碳源的影响 | 第54-56页 |
| ·碳源对生长期菌体的影响 | 第54-55页 |
| ·碳源对诱导期产酶的影响 | 第55-56页 |
| ·氮源的影响 | 第56-58页 |
| ·氮源对生长期菌体的影响 | 第56-57页 |
| ·氮源对诱导期产酶的影响 | 第57-58页 |
| ·培养基的pH对菌体生物量和产酶的影响 | 第58-59页 |
| ·培养基的pH对菌体生物量的影响 | 第59页 |
| ·培养基的pH对菌体产酶的影响 | 第59页 |
| ·接种量的影响 | 第59-61页 |
| ·接种量对生长期菌体的影响 | 第59-60页 |
| ·接种量对诱导期产酶的影响 | 第60-61页 |
| ·摇瓶转速对菌体生物量和产酶的影响 | 第61-62页 |
| ·摇瓶转速对菌体生物量的影响 | 第61页 |
| ·摇瓶转速对菌体产酶的影响 | 第61-62页 |
| ·温度对菌体生物量和产酶的影响 | 第62-63页 |
| ·温度对菌体生物量的影响 | 第62页 |
| ·温度对菌体产酶的影响 | 第62-63页 |
| ·甲醇对菌体生物量和产酶的影响 | 第63-65页 |
| ·甲醇诱导时间对菌体生物量和产酶的影响 | 第63-64页 |
| ·甲醇诱导浓度对菌体生物量和产酶的影响 | 第64-65页 |
| ·正交试验优化发酵条件 | 第65-66页 |
| ·正交实验的验证 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-71页 |
| 第四章 基因工程酵母产中性蛋白酶粗酶的酶学和应用性质研究 | 第71-79页 |
| ·材料和方法 | 第71-73页 |
| ·结果与分析 | 第73-77页 |
| ·中性蛋白酶的分子量测定 | 第73-74页 |
| ·酶作用的最适pH | 第74页 |
| ·pH对酶稳定性的影响 | 第74-75页 |
| ·酶作用的最适温度 | 第75页 |
| ·温度对酶稳定性的影响 | 第75-76页 |
| ·金属离子及EDTA对酶活力的影响 | 第76页 |
| ·酶对不同蛋白质底物的水解作用 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-79页 |
| 第五章 总结 | 第79-82页 |
| ·总结 | 第79-80页 |
| ·创新 | 第80页 |
| ·建议 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附录 | 第83-91页 |
| 附录1 论文中使用的缩写词及中英文对照 | 第83-84页 |
| 附录2 实验中所使用的培养基和常用试剂的配制 | 第84-86页 |
| 附录3 论文中使用的菌株和表达载体特性 | 第86-87页 |
| 附录4 枯草芽孢杆菌中性蛋白酶基因的核酸和氨基酸序列 | 第87-88页 |
| 附录5 克隆的中性蛋白酶基因与枯草芽孢杆菌中性蛋白酶基因(nprE)的同源性比较结果(BLASTN) | 第88-91页 |
