| 摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| Ⅰ 前言 | 第11-12页 |
| Ⅱ 文献综述 | 第12-31页 |
| ·马铃薯加工业发展概况 | 第12-13页 |
| ·马铃薯品种选育现状 | 第13-14页 |
| ·马铃薯育种目标 | 第13页 |
| ·马铃薯育种方法 | 第13-14页 |
| ·基因工程在马铃薯育种中的应用现状 | 第14-18页 |
| ·马铃薯抗病基因工程 | 第14-15页 |
| ·马铃薯抗病毒病基因工程 | 第14-15页 |
| ·马铃薯抗菌基因工程 | 第15页 |
| ·马铃薯抗虫基因工程 | 第15-16页 |
| ·马铃薯抗除草剂基因工程 | 第16页 |
| ·马铃薯块茎抗酶解褐变基因工程 | 第16-17页 |
| ·马铃薯块茎抗低温糖化基因工程 | 第17页 |
| ·马铃薯淀粉品质改良基因工程 | 第17-18页 |
| ·培育马铃薯高淀粉品种的研究现状 | 第18-29页 |
| ·淀粉合成代谢机制 | 第18-22页 |
| ·ADPG焦磷酸化酶(AGPase，EC 2.7.7.27) | 第22-24页 |
| ·AGPase的功能 | 第22页 |
| ·AGPase的定位 | 第22页 |
| ·AGPase的酶学 | 第22-23页 |
| ·AGPase的分子生物学 | 第23-24页 |
| ·淀粉合成酶(SS，EC 2.4.1.21) | 第24-26页 |
| ·SS的功能 | 第24页 |
| ·SS的定位 | 第24页 |
| ·SS的分类 | 第24-25页 |
| ·SS的酶学及分子生物学 | 第25-26页 |
| ·淀粉分支酶(SBE，EC 2.4.1.18) | 第26-27页 |
| ·SBE的功能 | 第26页 |
| ·SBE的定位 | 第26页 |
| ·SBE的分类 | 第26页 |
| ·SBE的酶学 | 第26-27页 |
| ·SBE的分子生物学 | 第27页 |
| ·提高马铃薯淀粉含量的基因工程 | 第27-29页 |
| ·基因的选择 | 第28页 |
| ·启动子的选择 | 第28-29页 |
| ·本研究的目的意义 | 第29-30页 |
| ·项目研究技术路线 | 第30-31页 |
| Ⅲ 马铃薯块茎特异性启动子Patatin基因克隆和E.coli glgC基因 的克隆及定点突变 | 第31-52页 |
| ·材料和方法 | 第31-40页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第31页 |
| ·菌株、质粒和植物材料 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第32-40页 |
| ·Patatin启动子基因片段的PCR扩增 | 第32-38页 |
| ·马铃薯基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·Patatin启动子基因PCR扩增 | 第33页 |
| ·PCR产物的凝胶电泳观察 | 第33页 |
| ·目的片段的回收 | 第33-34页 |
| ·回收的目的片段与T-vector连接及向宿主细胞的导入 | 第34-36页 |
| ·重组体的筛选与鉴定 | 第36-38页 |
| ·E.coli基因glgC的克隆及定点突变 | 第38-40页 |
| ·E.coli核基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·glgC基因PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·克隆、阳性重组子的筛选及检测，测序 | 第40页 |
| ·glgC基因PCR定点突变 | 第40页 |
| ·结果分析 | 第40-49页 |
| ·马铃薯叶片基因组DNA和E.coli核基因组DNA的提取与完整性鉴定 | 第40-41页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·克隆、阳性重组子的筛选 | 第42-44页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第44-48页 |
| ·glgC基因PCR定点突变 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| ·关于马铃薯叶片基因组DNA的提取方法和取材 | 第49-51页 |
| ·PCR引物中引入酶切位点 | 第51页 |
| ·基因的定点突变 | 第51-52页 |
| Ⅳ glgC基因在微生物中的表达产物鉴定 | 第52-61页 |
| ·材料和方法 | 第52-55页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第52页 |
| ·菌株、质粒和植物材料 | 第52页 |
| ·引物设计 | 第52页 |
| ·glgC基因原核表达载体构建及诱导表达 | 第52-55页 |
| ·glgC和glgC336基因亚克隆 | 第52-53页 |
| ·目标基因诱导表达 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第53-55页 |
| ·目标蛋白的回收 | 第55页 |
| ·结果分析 | 第55-60页 |
| ·glgC基因和glgC336基因的亚克隆 | 第55-56页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第56页 |
| ·表达产物的制备 | 第56-58页 |
| ·表达产物的分析 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·关于基因的原核表达载体构建 | 第60-61页 |
| Ⅴ 马铃薯块茎特异启动子Patatin控制的植物表达载体构建 | 第61-69页 |
| ·材料和方法 | 第61-65页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第61页 |
| ·菌株、质粒和植物材料 | 第61页 |
| ·Patatin+Gus和Patatin启动子控制下glgC基因植物表达载体的构建 | 第61-63页 |
| ·质粒DNA的提取方法 | 第61页 |
| ·pBI101质粒和pUCmP质粒的酶切和目的片段回收 | 第61-62页 |
| ·线状载体分子与目的基因DNA分子连接 | 第62页 |
| ·表达载体酶切鉴定 | 第62页 |
| ·pBIP质粒及pUCmGA、pUCmGC质粒的酶切和目的片段的回收、连接 | 第62-63页 |
| ·植物表达载体酶切鉴定 | 第63页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第63-65页 |
| ·感受态农杆菌制备 | 第63页 |
| ·Patatin+Gus及Patatin+glgC基因植物表达载体转化农杆菌 | 第63-64页 |
| ·农杆菌整合外源基因的PCR鉴定 | 第64-65页 |
| ·农杆菌Ti质粒DNA碱法小量提取 | 第64-65页 |
| ·农杆菌Ti质粒整合glgC基因的PCR检测 | 第65页 |
| ·结果分析 | 第65-67页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第65-67页 |
| ·表达载体导入农杆菌LBA4404 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·关于转化农杆菌及其鉴定 | 第67-68页 |
| ·关于植物表达载体的构建 | 第68-69页 |
| Ⅵ 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
