| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1 FoxO6基因 | 第11-15页 |
| 1.1 FoxO6基因的发现 | 第11页 |
| 1.2 FoxO6基因的结构 | 第11-12页 |
| 1.3 FoxO6基因生物学功能 | 第12-14页 |
| 1.3.1 FoxO6基因在骨骼肌中的作用 | 第12页 |
| 1.3.2 FoxO6基因在大脑中的作用 | 第12页 |
| 1.3.3 FoxO6基因对寿命的影响 | 第12-13页 |
| 1.3.4 FoxO6基因其它生物学作用 | 第13-14页 |
| 1.4 FoxO转录因子家族 | 第14-15页 |
| 2 MSTN基因 | 第15-18页 |
| 2.1 MSTN基因的发现 | 第15-16页 |
| 2.2 MSTN基因的结构及形成过程 | 第16-17页 |
| 2.3 MSTN基因的转录调控机制 | 第17-18页 |
| 3 关岭牛 | 第18-20页 |
| 3.1 中心产区及分布 | 第18页 |
| 3.2 体貌特征 | 第18-19页 |
| 3.3 产区自然生态条件 | 第19页 |
| 3.4 研究利用进展 | 第19-20页 |
| 4 研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 关岭牛FoxO6基因的克隆及生物信息学分析 | 第22-32页 |
| 1 材料与方法 | 第22-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 1.1.1 实验样品 | 第22页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第23页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 1.2.1 组织RNA的提取及反转录 | 第23-24页 |
| 1.2.2 FoxO6基因CDS区的引物设计 | 第24-25页 |
| 1.2.3 FoxO6基因CDS区的克隆 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.1 总RNA的提取和cDNA的合成 | 第25-26页 |
| 2.2 关岭牛FoxO6基因CDS区的扩增 | 第26页 |
| 2.3 FoxO6基因CDS区生物信息学分析 | 第26-30页 |
| 2.3.1 FoxO6基因的序列分析 | 第26-27页 |
| 2.3.2 FoxO6蛋白理化性质分析 | 第27页 |
| 2.3.3 FoxO6蛋白的二级结构预测 | 第27页 |
| 2.3.4 FoxO6蛋白的结构域预测 | 第27-28页 |
| 2.3.5 FoxO6蛋白的三级结构预测 | 第28页 |
| 2.3.6 FoxO6蛋白质跨膜螺旋特征预测 | 第28-29页 |
| 2.3.7 FoxO6蛋白信号肽预测与亚细胞定位预测 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 4 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 关岭牛MSTN基因启动子区的克隆及真核表达载体的构建 | 第32-41页 |
| 1 材料与方法 | 第32-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 1.1.1 实验样品 | 第32页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第32页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第32-33页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第33页 |
| 1.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 1.2.1 关岭牛组织DNA的提取 | 第33-34页 |
| 1.2.2 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 1.2.3 关岭牛MSTN基因启动子的克隆 | 第35页 |
| 1.2.4 pUCm-T-MSTN重组质粒的构建和鉴定 | 第35-36页 |
| 1.2.5 pGL3-Basic-MSTN重组质粒的构建和鉴定 | 第36-37页 |
| 1.2.6 重组质粒pGL3-Basic-MSTN的鉴定 | 第37页 |
| 1.2.7 重组质粒pGL3-Basic-MSTN的保存 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-39页 |
| 2.1 关岭牛组织DNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.2 MSTN基因启动子的克隆 | 第38页 |
| 2.3 pUCm-T-MSTN重组质粒的构建和鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4 pGL3-Basic-MSTN重组质粒的构建和鉴定 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-40页 |
| 4 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 FoxO6转录因子对关岭牛MSTN基因启动子活性的影响 | 第41-50页 |
| 1 材料与方法 | 第41-47页 |
| 1.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.1.1 实验样品 | 第41页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第41页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第41-42页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第42页 |
| 1.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 1.2.1 重组质粒pcDNA3.1（+）-FoxO6的构建 | 第42-43页 |
| 1.2.2 重组质粒pcDNA3.1（+）-FoxO6的提取 | 第43页 |
| 1.2.3 重组质粒pcDNA3.1（+）-FoxO6的鉴定 | 第43-44页 |
| 1.2.4 重组质粒pcDNA3.1（+）-FoxO6的保存 | 第44页 |
| 1.2.5 重组质粒pcDNA3.1(+)-FoxO6、PGL3-Basic-MSTN无内毒素质粒提取 | 第44页 |
| 1.2.6 小鼠C2C12细胞的培养 | 第44-45页 |
| 1.2.7 FoxO6转录因子对pGL3-Basic-MSTN活性的影响 | 第45-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-49页 |
| 2.1 重组载体pc DNA3.1(+)-Fox O6的构建 | 第47-48页 |
| 2.2 细胞的培养 | 第48页 |
| 2.3 双荧光素酶活性检测结果 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49页 |
| 4 小结 | 第49-50页 |
| 第五章 关岭牛FoxO6基因原核表达条件的初步摸索 | 第50-61页 |
| 1 材料与方法 | 第50-54页 |
| 1.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 1.1.1 实验样品 | 第50页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第50页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第50页 |
| 1.1.4 实验试剂的配制 | 第50-51页 |
| 1.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 1.2.1 重组质粒pET32a(+)-FoxO6的构建 | 第51页 |
| 1.2.2 重组质粒pET32a(+)-FoxO6的鉴定 | 第51-52页 |
| 1.2.3 重组质粒pET32a(+)-FoxO6的保存 | 第52页 |
| 1.2.4 重组蛋白表达形式的确定 | 第52-53页 |
| 1.2.5 诱导温度、IPTG浓度及甘氨酸对表达结果的影响 | 第53页 |
| 1.2.6 SDS-PAGE分析 | 第53-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-59页 |
| 2.1 重组载体pET32a(+)-FoxO6重组载体构建 | 第54-55页 |
| 2.2 重组蛋白的表达形式 | 第55-56页 |
| 2.3 诱导温度和IPTG浓度、甘氨酸对表达结果的影响 | 第56-59页 |
| 2.3.1 诱导温度和IPTG浓度对表达结果的影响 | 第56-58页 |
| 2.3.2 甘氨酸对表达结果的影响 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 4 小结 | 第60-61页 |
| 第六章 结论与展望 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
