| 中文摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-37页 |
| 1 蛋白激酶研究综述 | 第15-26页 |
| 2 丝状真菌的遗传转化研究综述 | 第26-35页 |
| ·原生质体-PEG 转化 | 第27页 |
| ·电激转化法 | 第27-28页 |
| ·转座子介导的转化 | 第28页 |
| ·醋酸锂转化法 | 第28页 |
| ·限制性内切酶介导的整合转化 | 第28-31页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第31-35页 |
| 3 选题的目的、研究内容和技术路线 | 第35-37页 |
| 第二章 长柄链格孢（A.LONGIPES）遗传转化系统的建立 | 第37-83页 |
| 第一节 长柄链格孢原生质体的制备与再生 | 第38-51页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·供试菌株 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·长柄链格孢原生质体的制备 | 第38-40页 |
| ·长柄链格孢原生质体的纯化 | 第40页 |
| ·长柄链格孢原生质体的再生和影响因素分析 | 第40-41页 |
| ·长柄链格孢原生质体再生的形态学观察 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-48页 |
| ·不同条件对长柄链格孢原生质体制备的影响 | 第41-45页 |
| ·长柄链格孢原生质体的再生和影响因素分析 | 第45-47页 |
| ·长柄链格孢原生质体再生的形态学观察 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| ·影响原生质体制备的因素 | 第48-49页 |
| ·影响原生质体再生的因素 | 第49-51页 |
| 第二节 长柄链格孢菌的限制性内切酶介导整合转化 | 第51-69页 |
| 1 材料与方法 | 第52-58页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-58页 |
| 2 结果 | 第58-65页 |
| ·线性质粒pUCATPH 的制备 | 第58页 |
| ·抑制长柄链格孢菌生长的潮霉素最佳浓度筛选 | 第58-59页 |
| ·REMI 转化的影响因素 | 第59-63页 |
| ·长柄链格孢REMI 转化子的PCR 验证 | 第63-64页 |
| ·REMI 转化子的鉴定 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-69页 |
| ·影响REMI 转化效率的因素 | 第65-68页 |
| ·REMI 的局限性 | 第68-69页 |
| 第三节 根癌农杆菌介导的长柄链格孢（A. LONGIPES）转化 | 第69-83页 |
| 1 材料和方法 | 第69-75页 |
| ·材料 | 第69-72页 |
| ·重组质粒转化农杆菌LBA4404 受体细胞 | 第72页 |
| ·抑制农杆菌生长的抗生素最佳浓度筛选 | 第72-73页 |
| ·农杆菌的转化和培养 | 第73页 |
| ·影响农杆菌介导的长柄链格孢转化效率的因素分析 | 第73-74页 |
| ·转化子的PCR 分析 | 第74页 |
| ·转化子的稳定性测定 | 第74页 |
| ·表型突变体的鉴定 | 第74-75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-80页 |
| ·农杆菌对头孢霉素敏感性的测定结果 | 第75页 |
| ·转化条件对转化效率的影响 | 第75-78页 |
| ·转化子的PCR 验证 | 第78-79页 |
| ·转化子的稳定性检验表型观察 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| ·根癌农杆菌菌株对转化的影响 | 第80页 |
| ·乙酰丁香酮( acetosyingone,AS)对转化的影响 | 第80-81页 |
| ·共培养时间和温度对转化的影响 | 第81页 |
| ·农杆菌和受体菌浓度对转化的影响 | 第81-83页 |
| 第三章 长柄链格孢（A. LONGIPES）蛋白激酶基因的克隆及序列分析.. | 第83-126页 |
| 1 材料和方法 | 第83-99页 |
| ·材料 | 第83-85页 |
| ·长柄链格孢（A. longipes）蛋白激酶基因cDNA 克隆 | 第85-99页 |
| 2 结果 | 第99-121页 |
| ·A. longipes 蛋白激酶基因中间片段的分离 | 第99-104页 |
| ·A. longipes 蛋白激酶基因(aapk1) cDNA 3’-末端的分离 | 第104-106页 |
| ·A. longipes 蛋白激酶基因(aapk1) cDNA 5’-末端的分离及序列分析 | 第106-109页 |
| ·A. longipes 蛋白激酶基因(aapk2) 3’和5’末端的分离及序列分析 | 第109-111页 |
| ·A. longipes 蛋白激酶基因(aapk1) cDNA 和 DNA 全长序列的扩增 | 第111-113页 |
| ·蛋白激酶aapk1 的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第113-121页 |
| 3 讨论 | 第121-126页 |
| ·Alternaria longipes 蛋白激酶基因cDNA 和DNA 的获得 | 第121-122页 |
| ·基因分离技术 | 第122-126页 |
| 第四章 长柄链格孢（A. LONGIPES）蛋白激酶基因的功能研究 | 第126-153页 |
| 1 材料与方法 | 第126-139页 |
| ·材料 | 第126-127页 |
| ·方法 | 第127-139页 |
| 2 结果与分析 | 第139-150页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第139页 |
| ·质粒 pUCATPH 的提取 | 第139-140页 |
| ·打靶载体的构建 | 第140-142页 |
| ·△aapk1 转化子的筛选 | 第142-145页 |
| ·△aapk1 转化子的southern 杂交 | 第145-146页 |
| ·△aapk1 转化子的RT-PCR | 第146-147页 |
| ·△aapk1 转化子生物学性状和致病性分析 | 第147-150页 |
| 3 讨论 | 第150-153页 |
| ·关于载体构建 | 第150-151页 |
| ·同源重组效率的影响因素 | 第151-153页 |
| 第五章 结论与建议 | 第153-155页 |
| 1 结论 | 第153-154页 |
| 2 建议 | 第154-155页 |
| 参考文献 | 第155-171页 |
| 致谢 | 第171-172页 |
| 攻读学位期间发表论文的情况 | 第172页 |
