| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-31页 |
| 1. 乙型脑炎 | 第14页 |
| 2. 乙型脑炎病原学及其分子生物学特征 | 第14-21页 |
| ·病原学 | 第14-15页 |
| ·分类学 | 第14-15页 |
| ·生物学特性 | 第15页 |
| ·增值特性 | 第15页 |
| ·JEV基因组结构与功能 | 第15-16页 |
| ·病毒蛋白 | 第16-21页 |
| ·结构蛋白 | 第17-19页 |
| ·非结构蛋白 | 第19-21页 |
| 3. 乙型脑炎流行病学 | 第21-23页 |
| ·流行现状 | 第21-22页 |
| ·传播媒介与宿主 | 第22-23页 |
| 4. JEV致病机制 | 第23-24页 |
| 5. 乙型脑炎疫苗研究进展 | 第24-28页 |
| ·灭活疫苗 | 第24-25页 |
| ·鼠脑灭活疫苗 | 第24页 |
| ·地鼠肾细胞灭活疫苗 | 第24页 |
| ·Vero细胞灭活疫苗 | 第24-25页 |
| ·减毒活疫苗活疫苗 | 第25-26页 |
| ·基因工程疫苗 | 第26-28页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第26页 |
| ·合成肽疫苗 | 第26-27页 |
| ·重组活疫苗 | 第27页 |
| ·核酸疫苗 | 第27-28页 |
| 6. 乙型脑炎诊断方法研究进展 | 第28-29页 |
| ·病毒的分离鉴定 | 第28页 |
| ·病毒抗原检测 | 第28-29页 |
| ·血清学诊断 | 第29页 |
| 7. 本研究的意义 | 第29-31页 |
| 第二章 乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1基因的原核表达 | 第31-42页 |
| 1. 材料 | 第31页 |
| ·病毒、菌种及细胞 | 第31页 |
| ·质粒及相关试剂 | 第31页 |
| 2. 方法 | 第31-37页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·病毒RNA提取及反转录 | 第31-37页 |
| ·细胞培养 | 第31-32页 |
| ·病毒基因组RNA提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR | 第32-33页 |
| ·PCR产物回收和纯化 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第34-36页 |
| ·转化菌的诱导表达 | 第36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| ·表达产物的Western blot检测 | 第36-37页 |
| ·表达产物的ELISA分析 | 第37页 |
| 3. 结果 | 第37-40页 |
| ·NS1基因的RT-PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·转化菌的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第39页 |
| ·表达产物的ELISA分析 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 乙型脑炎病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备 | 第42-50页 |
| 1. 材料及试剂 | 第42-43页 |
| ·实验动物与细胞 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·试剂配制 | 第43页 |
| 2. 方法 | 第43-46页 |
| ·免疫原的制备与免疫 | 第43-44页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第44页 |
| ·脾细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·细胞融合 | 第45页 |
| ·阳性单克隆细胞株的筛选 | 第45页 |
| ·单抗腹水的制备及抗体效价测定 | 第45页 |
| ·单抗的生物学鉴定 | 第45-46页 |
| ·Western blot | 第45-46页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第46页 |
| ·单抗亚类的鉴定 | 第46页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性测定 | 第46页 |
| 3. 结果 | 第46-48页 |
| ·免疫原纯化 | 第46-47页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第47页 |
| ·Western blot结果 | 第47页 |
| ·IFA结果 | 第47-48页 |
| ·单克隆抗体效价及亚类鉴定 | 第48页 |
| 4. 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 乙型脑炎病毒NS1蛋白病毒特异性抗原表位的鉴定 | 第50-63页 |
| 1. 材料和方法 | 第50-57页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·NS1蛋白的分段设计 | 第50-55页 |
| ·短肽融合蛋白的表达 | 第55页 |
| ·抗原表位的初步鉴定 | 第55页 |
| ·抗原表位的精确定位 | 第55-57页 |
| 2. 结果 | 第57-61页 |
| ·短肽融合蛋白的表达 | 第57页 |
| ·抗原表位定位 | 第57-59页 |
| ·抗原表位保守性分析 | 第59-60页 |
| ·抗原表位特异性分析 | 第60-61页 |
| 3. 讨论 | 第61-63页 |
| 全文结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |