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牡蛎常见原虫及其快速检测方法研究

摘要第1-12页
Abstract第12-14页
第一章 综述第14-27页
 1 贝类常见原虫病的概述第14-21页
   ·派琴虫第14-17页
     ·派琴虫的种类及分布第14页
     ·派琴虫的分类学地位第14-15页
     ·派琴虫的生活史和传播途径第15页
     ·派琴虫的流行病学第15-16页
     ·派琴虫的危害第16页
     ·派琴虫的防治第16-17页
   ·包拉米虫第17-18页
     ·包拉米虫的种类及分布第17页
     ·包拉米虫的分类学地位及传播方式第17页
     ·包拉米虫的流行病学第17-18页
     ·包拉米虫的危害第18页
     ·包拉米虫的防治第18页
   ·单孢子虫第18-19页
     ·单孢子虫的分类学地位第18-19页
     ·单孢子虫的流行病学第19页
     ·单孢子虫的危害及防治第19页
   ·马尔太虫第19-20页
     ·马尔太虫的种类及分类地位第19-20页
     ·马尔太虫的形态及生活史第20页
     ·马尔太虫的流行病学及危害第20页
   ·马氏闭合孢子虫第20-21页
 2 常见贝类原虫检测方法的研究进展第21-25页
   ·形态学检测方法第21-22页
     ·组织印记法第21页
     ·组织病理切片技术第21页
     ·电镜技术第21-22页
   ·免疫学检测方法第22页
   ·分子生物学检测方法第22-24页
     ·PCR 检测方法第22-23页
     ·原位杂交检测技术第23页
     ·实时荧光定量 PCR 技术第23-24页
   ·派琴虫体外培养方法的研究第24-25页
     ·液体巯基乙酸盐培养法(RFTM)第24页
     ·派琴虫其它体外培养方法第24-25页
 3 派琴虫种类变异研究进展第25-27页
第二章 牡蛎派琴虫的培养和形态学观察第27-34页
 1 材料与方法第27-29页
   ·材料第27-28页
     ·材料来源第27页
     ·主要试剂第27页
     ·主要设备与耗材第27页
     ·试剂的配制第27-28页
   ·试验方法第28-29页
     ·牡蛎样品石蜡切片的制备第28页
     ·派琴虫休眠孢子的培养第28-29页
     ·派琴虫休眠孢子染色镜检第29页
     ·派琴虫休眠孢子分裂方式的观察第29页
 2 结果与分析第29-32页
   ·派琴虫滋养体的观察第29页
   ·派琴虫休眠孢子的培养结果第29-32页
   ·派琴虫休眠孢子分裂方式的观察结果第32页
 3 讨论第32-34页
第三章 PCR 检测贝类常见原虫方法的建立与我国东南沿海贝类常见原虫的调查第34-46页
 1 材料与方法第34-38页
   ·材料第34-35页
     ·材料来源第34页
     ·主要试剂第34-35页
     ·试剂配制第35页
     ·主要设备第35页
   ·试验方法第35-38页
     ·样品总 DNA 提取第35页
     ·六种贝类常见原虫病 PCR 检测方法的建立第35-37页
     ·派琴虫和包拉米虫种类鉴定方法的建立第37-38页
   ·我国东南沿海几种常见贝类原虫的抽样调查与种类鉴定第38页
 2 结果第38-44页
   ·六种贝类原虫 PCR 检测结果第38-39页
   ·PCR 扩增阳性产物测序结果第39-41页
   ·我国东南沿海六种常见贝类原虫的抽样调查结果第41-42页
   ·派琴虫和包拉米虫种类鉴定结果第42-44页
     ·派琴虫种类鉴定结果第42-43页
     ·包拉米虫种类鉴定结果第43-44页
 3 讨论第44-46页
第四章 奥尔森派琴虫和北海派琴虫 ITS 基因序列分析及同源性分析第46-56页
 1 材料与方法第46-48页
   ·材料第46-47页
     ·材料来源第46页
     ·主要试剂与耗材第46页
     ·试剂配制第46-47页
     ·主要设备第47页
   ·试验方法第47-48页
     ·样品总 DNA 提取第47页
     ·ITS 序列 PCR 扩增引物的设计与合成第47页
     ·PCR 扩增体系及反应条件的优化第47页
     ·琼脂糖凝胶电泳分析第47-48页
     ·目的片段的回收、克隆和质粒提取第48页
     ·奥尔森派琴虫和北海派琴虫 ITS 序列及同源性分析第48页
 2 结果第48-50页
   ·ITS 序列 PCR 反应条件优化及扩增结果第48-49页
   ·重组质粒测序结果第49页
   ·奥尔森派琴虫 ITS 序列分析与同源性分析第49页
   ·北海派琴虫 ITS 序列分析与同源性分析第49-50页
 3 讨论第50-56页
第五章 多重 PCR 同时检测包拉米虫、奥尔森派琴虫和尼氏单孢子虫方法的建立和应用第56-63页
 1 材料和方法第56-58页
   ·实验材料第56页
     ·实验材料来源第56页
     ·试剂第56页
     ·实验设备第56页
   ·方法第56-58页
     ·样品总 DNA 的提取第56页
     ·多重 PCR 引物的设计与合成第56-57页
     ·PCR 扩增体系及反应条件的优化第57-58页
     ·PCR 扩增产物电泳分析及克隆测序第58页
     ·特异性试验第58页
     ·敏感性试验第58页
     ·临床样本的检测第58页
 2 结果第58-62页
   ·多重 PCR 反应条件优化结果第58-59页
   ·特异性试验结果第59-60页
   ·敏感性实验结果第60页
   ·测序结果与序列比对第60-61页
   ·临床样品的检测结果第61-62页
 3 讨论第62-63页
全文总结第63-64页
参考文献第64-71页
附录第71-75页
致谢第75页

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