| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 插图和附表 | 第14-17页 |
| 英文缩略表 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-37页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫毒素 | 第18-19页 |
| ·苏云金芽胞杆菌Cry 类杀虫晶体蛋白 | 第19-21页 |
| ·Bt 杀虫晶体蛋白及其分类 | 第19页 |
| ·对地下害虫蛴螬有杀虫活性的基因 | 第19-21页 |
| ·Cry 类杀虫晶体蛋白结构与功能之间的关系 | 第21-24页 |
| ·Cry 类杀虫晶体蛋白结构 | 第21-22页 |
| ·Cry 类杀虫晶体蛋白结构与功能的关系 | 第22-24页 |
| ·Cry 杀虫晶体蛋白的作用方式 | 第24-30页 |
| ·作用模型 | 第24-26页 |
| ·原毒素溶解与活化 | 第26-27页 |
| ·与受体结合 | 第27-30页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的应用 | 第30-35页 |
| ·转基因微生物 | 第30-34页 |
| ·转杀虫cry 基因植物 | 第34-35页 |
| ·转基因生物的安全性 | 第35-36页 |
| ·本论文研究的目的与意义 | 第36-37页 |
| 第二章 Bt145 菌株中cry8 类基因的克隆 | 第37-53页 |
| ·材料与试剂 | 第37-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第37页 |
| ·培养基与抗生素 | 第37-38页 |
| ·酶与生化试剂 | 第38页 |
| ·常用溶液与缓冲液 | 第38-39页 |
| ·供试昆虫 | 第39页 |
| ·仪器设备 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-45页 |
| ·Bt145 菌株形态观察 | 第39页 |
| ·Bt145 菌株生长曲线测定及蛋白检测 | 第39-40页 |
| ·Bt145 菌株的大质粒提取 | 第40页 |
| ·Bt145 菌株cry 基因的 PCR-RFLP | 第40-42页 |
| ·cry8 类基因的克隆与表达 | 第42页 |
| ·大肠杆菌JM110 热击感受态细胞制备与热击转化 | 第42页 |
| ·大肠杆菌SCS110 电击感受态细胞制备与电击转化 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第43页 |
| ·Bt 电击感受态细胞的制备与电击转化 | 第43页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第43-44页 |
| ·序列测定及分析 | 第44页 |
| ·cry8 类新基因在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株中的表达 | 第44页 |
| ·生测菌株粉剂的制备 | 第44页 |
| ·Bt 菌株杀虫活性的测定 | 第44-45页 |
| ·数据处理 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-51页 |
| ·Bt145 菌株生物学特性的研究 | 第45-46页 |
| ·Bt145 的生长曲线与菌株蛋白表达 | 第46页 |
| ·Bt145 的大质粒图谱 | 第46页 |
| ·Bt145 菌株中杀虫晶体蛋白基因的PCR-RFLP 鉴定 | 第46-47页 |
| ·Bt145 菌株中新型cry8 类基因的克隆与表达 | 第47-48页 |
| ·克隆的cry8 类新基因的序列及分析 | 第48-50页 |
| ·cry8Ga2 基因在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株中的表达 | 第50页 |
| ·cry8Ga2 基因杀虫活性的研究 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第三章 BtSU4 菌株中cry8 类基因的克隆 | 第53-68页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌株与质粒 | 第53页 |
| ·其它材料 | 第53-54页 |
| ·研究方法 | 第54-55页 |
| ·cry8 类基因的克隆 | 第54页 |
| ·cry8 类基因的Bt 表达载体的构建 | 第54页 |
| ·Bt 菌株蛋白的提取 | 第54-55页 |
| ·Bt 蛋白的消化 | 第55页 |
| ·结果和分析 | 第55-66页 |
| ·BtSU4 菌体形态特征观察 | 第55-56页 |
| ·Bt 菌株生长曲线测定 | 第56-57页 |
| ·BtSU4 菌株的大质粒图谱分析 | 第57页 |
| ·BtSU4 菌株中杀虫晶体蛋白基因的PCR-RFLP | 第57-58页 |
| ·BtSU4 菌株中新型cry8 类基因的克隆 | 第58-59页 |
| ·cry8 类基因序列测定及分析 | 第59-61页 |
| ·BtSU4 菌株中新型cry8 类基因的表达研究 | 第61-63页 |
| ·Cry8 蛋白的消化 | 第63页 |
| ·BtSU4 野生菌株和重组菌株HD8H 和HD81 杀虫活性的研究 | 第63-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| 第四章 cry 基因在宿主菌 BtSU4 菌株中的表达分析 | 第68-76页 |
| ·材料 | 第68-69页 |
| ·菌株与引物 | 第68页 |
| ·培养基与抗生素 | 第68页 |
| ·酶与生化试剂 | 第68-69页 |
| ·常用溶液与缓冲液 | 第69页 |
| ·实验仪器 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-72页 |
| ·RNA 的提取与纯化 | 第69-70页 |
| ·RT-PCR | 第70-71页 |
| ·Cry8Ha1 和Cry8Ia1 蛋白的提取与纯化 | 第71页 |
| ·抗体的制备与纯化 | 第71-72页 |
| ·SDS-PAGE 及Western 杂交 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-74页 |
| ·cry8Ha1 和cry8Ia1 基因在BtSU4 菌株中的转录分析 | 第72-74页 |
| ·Cry8Ia1 蛋白的纯化及抗体的制备 | 第74页 |
| ·cry8Ia1 基因在BtSU4 菌株中的表达情况 | 第74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 第五章 对鞘翅目害虫高毒力工程菌的构建 | 第76-86页 |
| ·材料与试剂 | 第76-77页 |
| ·菌株和质粒 | 第76页 |
| ·供试昆虫 | 第76页 |
| ·酶与试剂 | 第76-77页 |
| ·仪器设备 | 第77页 |
| ·试验方法 | 第77-78页 |
| ·工程菌株3A-SU4 和3A-HBF 的构建 | 第77页 |
| ·工程菌的扫描电镜检测 | 第77页 |
| ·工程菌的SDS-PAGE 和Western blot 检测 | 第77页 |
| ·工程菌中质粒的遗传稳定性 | 第77-78页 |
| ·工程菌的生长情况观察 | 第78页 |
| ·室内生物活性测定菌株粉剂的制备 | 第78页 |
| ·工程菌株的生物活性测定 | 第78页 |
| ·生测数据处理 | 第78页 |
| ·结果与分析 | 第78-85页 |
| ·工程菌的构建 | 第78页 |
| ·晶体形态检测 | 第78-79页 |
| ·工程菌株的SDS-PAGE 检测 | 第79页 |
| ·工程菌的遗传稳定性 | 第79-81页 |
| ·工程菌3A-SU4 和3A-HBF 的生长特性 | 第81-82页 |
| ·工程菌株室内生物活性的测定 | 第82-85页 |
| ·讨论 | 第85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第六章 Cry8 类蛋白作用机理的研究 | 第86-101页 |
| ·材料与试剂 | 第86-89页 |
| ·菌株与质粒 | 第86-87页 |
| ·引物对及扩增的片段 | 第87-88页 |
| ·培养基与抗生素 | 第88页 |
| ·酶与生化试剂 | 第88页 |
| ·缓冲液 | 第88页 |
| ·供试昆虫 | 第88页 |
| ·主要仪器 | 第88-89页 |
| ·研究方法 | 第89-92页 |
| ·重叠PCR 获得杂合基因 | 第89页 |
| ·杂合基因的PCR-RFLP 鉴定 | 第89-90页 |
| ·杂合基因的克隆与表达 | 第90-91页 |
| ·中肠液的提取与蛋白的消化实验 | 第91页 |
| ·Cry8 类蛋白对胰凝乳蛋白酶稳定性及生物活性 | 第91页 |
| ·BBMV 的制备 | 第91页 |
| ·Bt 毒素的提取与纯化 | 第91-92页 |
| ·Bt 毒素的生物素标记 | 第92页 |
| ·Bt 毒素与昆虫BBMV 的体外结合实验 | 第92页 |
| ·结果与分析 | 第92-98页 |
| ·杂合基因的获取与鉴定 | 第92-93页 |
| ·杂合基因的克隆 | 第93页 |
| ·杂合基因在HD-73~-菌株中的表达 | 第93-94页 |
| ·杂合蛋白生物活性的测定 | 第94-96页 |
| ·昆虫中肠液对Cry8 类蛋白的消化作用 | 第96-97页 |
| ·Cry8 类蛋白对胰凝乳蛋白酶的稳定性实验 | 第97-98页 |
| ·Cry 毒素的纯化与生物素标记 | 第98页 |
| ·Cry 毒素与蛴螬BBMV 结合分析 | 第98页 |
| ·讨论 | 第98-99页 |
| ·小结 | 第99-101页 |
| 第七章 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 作者简历 | 第119页 |
