| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 一、 前言 | 第12-29页 |
| 1.轮状病毒的结构 | 第12-18页 |
| ·轮状病毒的核心 | 第13-14页 |
| ·轮状病毒内衣壳 | 第14-15页 |
| ·轮状病毒外衣壳 | 第15-18页 |
| 2.轮状病毒非结构蛋白 | 第18-19页 |
| 3.轮状病毒流行病学 | 第19-22页 |
| 4.轮状病毒感染的动物研究模型 | 第22页 |
| 5.轮状病毒的感染与免疫 | 第22-24页 |
| 6.轮状病毒的预防与控制 | 第24-28页 |
| ·轮状病毒检测试剂的发展 | 第24-26页 |
| ·轮状病毒疫苗的发展 | 第26-28页 |
| 7.本研究的目的与意义 | 第28页 |
| 8.主要研究内容 | 第28-29页 |
| 二、 材料和方法 | 第29-45页 |
| 1.材料 | 第29-35页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·主要试剂和材料 | 第30-32页 |
| ·常用溶液和培养基的配制 | 第32-35页 |
| 2.方法 | 第35-45页 |
| ·分子克隆 | 第35-39页 |
| ·SDS-聚丙烯胺凝胶电泳(SDS—PAGE) | 第39页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第39-41页 |
| ·蛋白复性方法 | 第41-42页 |
| ·VLP的体外组装 | 第42页 |
| ·免疫印迹法(Western Blotting) | 第42-43页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA):间接法 | 第43页 |
| ·计算机辅助分析与设计 | 第43-44页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第44-45页 |
| 三、 结果与分析 | 第45-70页 |
| 1.轮状病毒基因的获取 | 第45-46页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·RNA提取与扩增 | 第45-46页 |
| 2.轮状病毒核心蛋白VP2的原核表达及其CLP的组装 | 第46-55页 |
| ·VP2的克隆 | 第46-47页 |
| ·VP2表达质粒的构建与鉴定 | 第47-50页 |
| ·VP2的大量表达与纯化 | 第50-51页 |
| ·VP2 CLP的体外组装 | 第51-52页 |
| ·VP2及其CLP的稳定性的研究 | 第52-55页 |
| 3.VP6的表达、纯化及性质的初步研究 | 第55-65页 |
| ·VP6基因的克隆 | 第55-56页 |
| ·VP6表达质粒的构建与鉴定 | 第56-59页 |
| ·VP6的表达、纯化 | 第59-61页 |
| ·VP6的免疫反应性 | 第61-63页 |
| ·VP6的结构模拟与分析 | 第63-65页 |
| 4.VP4和VP7克隆和表达质粒的构建 | 第65-67页 |
| 5.轮状病毒结构蛋白单抗的制备及VP6单抗在轮状病毒检测中的初步应用 | 第67-70页 |
| ·轮状病毒单克隆抗体的制备与鉴定 | 第67-68页 |
| ·VP6单克隆抗体在轮状病毒检测中的初步应用 | 第68-70页 |
| 四、 讨论 | 第70-74页 |
| 1.轮状病毒疫苗研究现状及发展趋势 | 第70-71页 |
| 2.RV结构蛋白在原核表达系统的表达与纯化 | 第71-72页 |
| 3.CLP的体外组装 | 第72页 |
| 4.VP6的结构与组装 | 第72-73页 |
| 5.VP6单克隆抗体的制备与应用 | 第73-74页 |
| 总结与展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-90页 |
| 致谢 | 第90页 |