英文缩略词及中文对照表 | 第1-16页 |
中文摘要 | 第16-19页 |
ABSTRACT | 第19-23页 |
第一章 文献综述 | 第23-63页 |
1 植物根系吸收铁的机制 | 第24-27页 |
·机理Ⅰ | 第24-26页 |
·机理Ⅱ | 第26-27页 |
2 植物缺铁适应性及其调控 | 第27-30页 |
·植物缺铁适应性 | 第27-28页 |
·植物缺铁适应性的调控 | 第28-30页 |
·调节部位 | 第28-29页 |
·缺铁胁迫信号物质 | 第29-30页 |
3 土壤微生物改善植物铁营养 | 第30-39页 |
·根际微生物通过分泌嗜铁素,增加土壤中铁的生物有效性 | 第31-37页 |
·嗜铁素的概念及分类 | 第31-36页 |
·根际微生物分泌嗜铁素,增加土壤中铁的生物有效性 | 第36-37页 |
·土壤微生物与植物的共生作用,改善植物的铁营养状况 | 第37-39页 |
·根瘤菌与植物的共生作用,增强植物缺铁的生理响应 | 第37-38页 |
·菌根真菌与植物的共生作用,改善植物的根系形态和提高铁的生物有效性 | 第38-39页 |
4 嗜铁菌的筛选 | 第39-44页 |
·嗜铁素在促进植物生长方面的作用 | 第41-42页 |
·嗜铁素在植物病害防治方面的作用 | 第42-43页 |
·常用的嗜铁素检测方法 | 第43页 |
·嗜铁素拮抗菌的筛选 | 第43-44页 |
5 嗜铁素相关基因研究进展 | 第44-53页 |
·生物合成相关基因 | 第45-49页 |
·芽孢杆菌嗜铁素生物合成相关基因 | 第45-46页 |
·其它微生物嗜铁素生物合成相关基因 | 第46-49页 |
·调控基因 | 第49-53页 |
·芽孢杆菌嗜铁素调控相关基因 | 第49-51页 |
·其它微生物嗜铁素调控相关基因 | 第51-53页 |
6 基因功能研究进展 | 第53-61页 |
·基因的生物信息学分析 | 第54页 |
·基因的时空表达谱分析 | 第54-55页 |
·mRNA 水平的基因表达谱分析 | 第55页 |
·蛋白质水平的表达谱分析 | 第55页 |
·基因的功能预测 | 第55-56页 |
·利用生物信息学进行功能学上的预测 | 第55-56页 |
·从结构学方面预测基因的功能 | 第56页 |
·基因功能的实验学验证 | 第56-61页 |
·基因敲除和基因敲入 | 第56-59页 |
·基因敲除技术的操作步骤 | 第56-57页 |
·基因敲除技术的应用及前景 | 第57-58页 |
·基因敲除技术的缺陷 | 第58-59页 |
·人工染色体的转导 | 第59页 |
·反义技术 | 第59页 |
·microRNA | 第59-60页 |
·基因诱捕技术和基因诱捕数据库 | 第60页 |
·微阵列分析 | 第60-61页 |
7 本研究的目的意义和研究内容 | 第61-63页 |
·目的意义 | 第61页 |
·研究内容 | 第61-63页 |
第二章 嗜铁细菌枯草芽孢杆菌CAS15 的分离鉴定 | 第63-81页 |
1 材料与方法 | 第63-70页 |
·材料 | 第63-64页 |
·土样采集 | 第63页 |
·试剂 | 第63-64页 |
·培养基 | 第64页 |
·方法 | 第64-70页 |
·产嗜铁素细菌的分离筛选 | 第64-65页 |
·CAS 蓝色检测液的制作 | 第64-65页 |
·通用CAS 检测平板制作 | 第65页 |
·菌株的分离与纯化 | 第65页 |
·CAS15 的种类鉴定 | 第65-68页 |
·形态观察及部分生理生化指标的测定 | 第65页 |
·CAS15 的分子鉴定 | 第65-68页 |
·嗜铁素分析 | 第68-69页 |
·嗜铁素的电喷雾离子化质谱分析(ESI-MS) | 第68-69页 |
·DHB(G)分析 | 第69页 |
·CAS15 分泌嗜铁素的影响因素 | 第69-70页 |
·不同培养基对CAS15 嗜铁素分泌的影响 | 第69页 |
·pH 值的影响 | 第69页 |
·温度的影响 | 第69-70页 |
·碳源的影响 | 第70页 |
·外源氨基酸的影响 | 第70页 |
2 结果与分析 | 第70-79页 |
·产嗜铁素细菌的筛选 | 第70-71页 |
·CAS15 的种类鉴定 | 第71-73页 |
·形态特征与生理生化鉴定 | 第71页 |
·分子鉴定 | 第71-73页 |
·嗜铁素的质谱分析 | 第73页 |
·DHB(G)分析 | 第73-74页 |
·CAS15 嗜铁素分泌影响因素 | 第74-79页 |
·培养基对嗜铁素分泌的影响 | 第74-75页 |
·pH 值对嗜铁素分泌的影响 | 第75-76页 |
·温度对嗜铁素分泌的影响 | 第76页 |
·碳源对嗜铁素分泌的影响 | 第76-77页 |
·外源氨基酸对嗜铁素分泌的影响 | 第77-79页 |
3 讨论 | 第79-81页 |
第三章 CAS15 生防效果初步评价 | 第81-92页 |
1 材料与方法 | 第81-84页 |
·材料 | 第81-82页 |
·方法 | 第82-84页 |
·室内拮抗试验 | 第82页 |
·室内平板对峙试验 | 第82页 |
·培养液过滤液的抑制作用 | 第82页 |
·CAS15 对芒果炭疽病菌的抑制作用 | 第82-83页 |
·CAS15 菌悬液的制备 | 第82页 |
·炭疽病病原菌孢子悬浮液的制备 | 第82页 |
·CAS15 对芒果炭疽病的抑制作用 | 第82-83页 |
·CAS15 菌液过滤液对黄瓜种子发芽的影响 | 第83-84页 |
·CAS15 菌液过滤液的配制 | 第83页 |
·黄瓜种子消毒、浸种 | 第83-84页 |
2 结果与分析 | 第84-90页 |
·室内平板对峙试验 | 第84-85页 |
·培养液过滤液的抑制作用 | 第85-87页 |
·对芒果炭疽病的抑制作用 | 第87-89页 |
·CAS15 菌液过滤液对黄瓜种子发芽率及芽长的影响 | 第89-90页 |
3 讨论 | 第90-92页 |
第四章 CAS15 dhbC 基因的克隆及序列分析 | 第92-114页 |
1 材料与方法 | 第92-95页 |
·材料 | 第92页 |
·菌株 | 第92页 |
·试剂 | 第92页 |
·方法 | 第92-95页 |
·CAS15 dhbC 基因的克隆 | 第92-95页 |
·引物设计与合成 | 第92-93页 |
·dhbC 基因的PCR 扩增 | 第93页 |
·PCR 产物回收 | 第93-94页 |
·pMD 18-T Vector 与PCR 产物的连接 | 第94页 |
·感受态细胞(E.coli DH5α)的制备及转化 | 第94-95页 |
·转化子的PCR 检测及测序 | 第95页 |
·CAS15 dhbC 基因序列的生物信息学分析 | 第95页 |
2 结果与分析 | 第95-111页 |
·CAS15 dhbC 基因的克隆与序列分析 | 第95-106页 |
·CAS15 dhbC 基因的克隆 | 第95-97页 |
·CAS15 dhbC 基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第97-101页 |
·CAS15 dhbC 基因酶切位点分析 | 第101-103页 |
·CAS15 dhbC 基因编码产物DhbC 氨基酸组成及原子组成 | 第103页 |
·CAS15 dhbC 基因编码产物DhbC 的活性位点 | 第103-104页 |
·DhbC 蛋白同源性分析 | 第104-106页 |
·DhbC 的结构预测 | 第106-111页 |
·氨基酸标度预测 | 第106页 |
·DhbC 的二级结构预测 | 第106-108页 |
·DhbC 的空间结构预测 | 第108-111页 |
·卷曲螺旋结构域预测 | 第108-109页 |
·DhbC 的α-碳偏差值分析 | 第109页 |
·DhbC 的抑制分配率分析 | 第109页 |
·DhbC 的毒力分配率分析 | 第109-111页 |
·DhbC 的三级结构预测 | 第111页 |
3 讨论 | 第111-114页 |
第五章 CAS15 dhbC 基因的原核表达 | 第114-129页 |
1 材料与方法 | 第114-123页 |
·材料 | 第114页 |
·菌株、质粒 | 第114页 |
·试剂 | 第114页 |
·方法 | 第114-123页 |
·表达载体的构建 | 第114-118页 |
·质粒pMD-dhbC 和pET-30a(+)的提取与纯化 | 第114-115页 |
·质粒pMD-dhbC 双酶切及dhbC 基因片段的回收 | 第115-116页 |
·表达载体pET-30a(+)双酶切及大片段的回收 | 第116-117页 |
·dhbC 基因与pET-30a(+)大片段的连接 | 第117页 |
·E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备及转化 | 第117-118页 |
·重组子的菌液PCR 鉴定 | 第118页 |
·重组质粒的提取及双酶切鉴定 | 第118页 |
·dhbC 基因的诱导表达 | 第118-121页 |
·工程菌的诱导 | 第118-119页 |
·SDS-PAGE 分析 | 第119-120页 |
·最佳诱导温度分析 | 第120页 |
·重组蛋白DhbC 可溶性分析 | 第120-121页 |
·表达产物的纯化 | 第121页 |
·重组蛋白DhbC 的Western blotting 分析 | 第121-123页 |
·Western-blotting 所用的试剂和缓冲液 | 第121-122页 |
·Western-blotting 杂交的步骤 | 第122-123页 |
2 结果与分析 | 第123-127页 |
·表达载体的构建与工程菌的筛选 | 第123-124页 |
·dhbC 基因在大肠杆菌中的表达 | 第124-125页 |
·最佳诱导温度分析 | 第125页 |
·重组蛋白 DhbC 可溶性分析 | 第125-126页 |
·表达产物的纯化 | 第126页 |
·重组蛋白 DhbC Western blot 分析 | 第126-127页 |
3 讨论 | 第127-129页 |
第六章 B.subtilis CAS15 嗜铁素基因 dhbC 功能验证 | 第129-139页 |
1 材料与方法 | 第129-134页 |
·材料 | 第129页 |
·供试菌株 | 第129页 |
·载体和质粒 | 第129页 |
·方法 | 第129-134页 |
·引物设计与合成 | 第129-130页 |
·新霉素抗性基因(neo~r)DNA 片段的获得 | 第130页 |
·枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第130-131页 |
·枯草芽孢杆菌感受态制备培养基 | 第130页 |
·枯草芽孢杆菌感受态制备 | 第130-131页 |
·转化 | 第131页 |
·同源重组转化子的检测 | 第131页 |
·dhbC 基因的重新导入 | 第131页 |
·回复株斑点杂交验证 | 第131-133页 |
·所需溶液的配制 | 第131-132页 |
·杂交探针的制备 | 第132-133页 |
·DNA 的变性和固定 | 第133页 |
·杂交 | 第133页 |
·洗膜和显色 | 第133页 |
·dhbC 基因的功能验证 | 第133-134页 |
2 结果与分析 | 第134-137页 |
·neo~r DNA 片段的获得 | 第134页 |
·dhbC 基因的敲除和缺失突变株的获得 | 第134-135页 |
·dhbC 基因的重新导入和回复株的 PCR 鉴定 | 第135-136页 |
·回复株的斑点杂交检测 | 第136页 |
·dhbC 基因功能验证 | 第136-137页 |
3 讨论 | 第137-139页 |
结论与展望 | 第139-143页 |
参考文献 | 第143-161页 |
附录 | 第161-164页 |
致谢 | 第164-165页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第165页 |