| ACKNOWLEDGEMENT | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| CHAPTER 1: INTRODUCTION | 第19-41页 |
| 1.1 Breast Cancer | 第20-22页 |
| 1.2 Historical overview of breast cancer | 第22-23页 |
| 1.3 Basis and Origins | 第23-26页 |
| 1.3.1 Gender | 第25页 |
| 1.3.2 Personal history | 第25页 |
| 1.3.3 Family history | 第25页 |
| 1.3.4 Genetic alterations | 第25页 |
| 1.3.5 Long-term use of menopausal hormone therapy | 第25页 |
| 1.3.6 Alcohol consumption | 第25-26页 |
| 1.3.7 Body weight | 第26页 |
| 1.3.8 Breast density | 第26页 |
| 1.3.9 Radiation therapy | 第26页 |
| 1.4 Types of breast cancer | 第26-28页 |
| 1.4.1 Non-invasive cancer (in situ) | 第26-27页 |
| 1.4.2 Invasive cancer (infiltrating) | 第27页 |
| 1.4.3 Benign breast tumors | 第27-28页 |
| 1.5 Treatment methodologies | 第28-29页 |
| 1.6 miRNA | 第29-32页 |
| 1.7 Role of miRNA in cancer | 第32-33页 |
| 1.8 Tumor suppressor miR-135a | 第33-34页 |
| 1.9 MCF-7 Cells | 第34-36页 |
| 1.10 ETS transcription factor | 第36-39页 |
| 1.11 Signaling pathway of ELK1 transcription factor | 第39-41页 |
| CHAPTER 2: MATERIALS AND METHODS | 第41-66页 |
| 附件 | 第42-46页 |
| 2.1 Other related chemicals | 第46页 |
| 2.2 Media and buffers | 第46-48页 |
| 2.2.1 RPM1 1640-Medium | 第46-47页 |
| 2.2.2 PBS | 第47页 |
| 2.2.3 Trypsin | 第47页 |
| 2.2.4 Crystal violet staining reagent | 第47页 |
| 2.2.5 Modified RIPA buffer | 第47-48页 |
| 2.3 Protein related reagents & buffer for western blotting | 第48-49页 |
| 2.3.1 30% Acrylamide 1L | 第48页 |
| 2.3.2 1.5 M Tris HCl (PH 8.8) | 第48页 |
| 2.3.3 1.0 M Tris-HCl(PH 6.8) | 第48页 |
| 2.3.4 10% SDS solution | 第48页 |
| 2.3.5 10% Ammonium per sulfate solution (APS) | 第48页 |
| 2.3.6 100 mM Sodium fluoride solution | 第48页 |
| 2.3.7 100 mM PMSF | 第48-49页 |
| 2.3.8 5X Running buffer | 第49页 |
| 2.3.9 10X Transfer buffer | 第49页 |
| 2.3.10 PBST | 第49页 |
| 2.3.11 Buffer for DNA electrophoresis | 第49页 |
| 2.3.12 75% Ethyl alcohol | 第49页 |
| 2.3.13 0.1%Triton X-100 solution | 第49页 |
| 2.4 Cloning | 第49-53页 |
| 2.4.1 Cloning conditions | 第51页 |
| 2.4.2 Digestion of plasmid | 第51-52页 |
| 2.4.3 Ligation | 第52页 |
| 2.4.4 Transformation | 第52-53页 |
| 2.5 Plasmid extraction | 第53-55页 |
| 2.5.1 Mini Prep plasmid extraction | 第53-54页 |
| 2.5.2 Midi Prep plasmid extraction | 第54-55页 |
| 2.5.2.1 Collection of bacteria DH5a | 第54页 |
| 2.5.2.2 Buffer S1 | 第54页 |
| 2.5.2.3 Buffer S2 | 第54页 |
| 2.5.2.4 Buffer S3k | 第54页 |
| 2.5.2.5 Buffer B | 第54-55页 |
| 2.5.2.6 Buffer W1 | 第55页 |
| 2.5.2.7 Buffer W2 | 第55页 |
| 2.6 Transfection | 第55-56页 |
| 2.6.1 shRNA Transfection | 第55-56页 |
| 2.7 RNA extraction and PCR | 第56-61页 |
| 2.7.1 Extraction of total RNA | 第56-57页 |
| 2.7.2 cDNA synthesis | 第57-58页 |
| 2.7.3 PCR | 第58-59页 |
| 2.7.4 Real time PCR | 第59-61页 |
| 2.8 Western blot | 第61-64页 |
| 2.8.1 Sample preparation for western blotting | 第61-62页 |
| 2.8.2 Quantification of Protein concentration | 第62页 |
| 2.8.3 Gel preparation for WB | 第62-63页 |
| 2.8.4 Blotting | 第63-64页 |
| 2.9 Clonogenic assay | 第64页 |
| 2.10 Cell proliferation assay | 第64页 |
| 2.11 Luciferase assay | 第64-65页 |
| 2.12 Statistical analysis | 第65-66页 |
| CHAPTER 3: RESULTS | 第66-81页 |
| 3.1 Expression of mir-135a in breast cell lines and tissue samples | 第67-69页 |
| 3.2 Induced expression of mir-135a inhibits colony formation and cell proliferation | 第69-71页 |
| 3.3 miRNA- 135a target genes prediction | 第71-73页 |
| 3.4 ELK1 and ELK3 as a direct targets of miR-135a | 第73-75页 |
| 3.5 Silencing of ELK1 and ELK3 genes | 第75-77页 |
| 3.6 Function of ELK1 and ELK3 oncogenes | 第77-79页 |
| 3.7 ELK1 or ELK3 restore miR-135a suppressed cell viability | 第79-81页 |
| CHAPTER 4: DISCUSSION | 第81-85页 |
| 4.1 miR-135a expression in breast cancer cells | 第82-83页 |
| 4.2 Molecular targets for miR-135a | 第83-85页 |
| 4.3 Functions of ELK1 and ELK3 oncogenes | 第85页 |
| Conclusion | 第85-87页 |
| REFERENCES | 第87-96页 |
| List of publications | 第96页 |
