| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-26页 |
| ·有机磷降解酶及其研究进展 | 第11-16页 |
| ·有机磷降解酶的研究概况 | 第11-13页 |
| ·有机磷降解酶分子结构与酶活性关系的研究进展 | 第13-16页 |
| ·蛋白质工程研究进展 | 第16-24页 |
| ·蛋白质工程 | 第16页 |
| ·定向进化技术 | 第16-18页 |
| ·理性设计策略 | 第18-20页 |
| ·蛋白质工程技术用于提高酶蛋白热稳定性的研究进展 | 第20-22页 |
| ·蛋白质工程技术用于改变酶蛋白底物特异性的研究进展 | 第22-23页 |
| ·蛋白质工程技术用于有机磷降解酶的研究进展 | 第23-24页 |
| ·问题及展望 | 第24-25页 |
| ·研究的目的意义 | 第25-26页 |
| 第二章 甲基对硫磷水解酶OPHC2中二硫键的研究 | 第26-48页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·工具酶 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-38页 |
| ·甲基对硫磷水解酶OPHC2三级结构模拟及分析 | 第28-29页 |
| ·定点突变Cys110和Cys146 | 第29-33页 |
| ·突变酶在大肠杆菌中的诱导表达与检测 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌表达突变酶的纯化 | 第34-35页 |
| ·甲基对硫磷水解酶OPHC2中二硫键的确定 | 第35页 |
| ·突变酶的酶学性质研究 | 第35-37页 |
| ·甲基对硫磷水解酶OPHC2及其突变酶的光谱分析 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-46页 |
| ·多序列比对及三维结构模型分析计算结果 | 第38-39页 |
| ·突变体的获得及原核表达纯化 | 第39-40页 |
| ·二硫键的确定 | 第40-42页 |
| ·突变酶酶学性质分析 | 第42-44页 |
| ·OPHC2及其突变酶的光谱分析 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第三章 扩大甲基对硫磷水解酶OPHC2底物特异性的研究 | 第48-65页 |
| ·实验材料 | 第48-50页 |
| ·菌株与质粒 | 第48页 |
| ·工具酶 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48-49页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第49-50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-56页 |
| ·甲基对硫磷水解酶OPHC2的三维结构模拟 | 第50-51页 |
| ·甲基对硫磷水解酶OPHC2饱和突变体库的构建 | 第51-52页 |
| ·突变重组子的筛选 | 第52-53页 |
| ·组合突变体的构建 | 第53页 |
| ·突变酶在酵母中表达与检测 | 第53-55页 |
| ·突变酶的酶学性质研究 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-62页 |
| ·饱和突变位点的选择 | 第56页 |
| ·饱和突变体库阳性率的确定 | 第56-57页 |
| ·饱和突变体库重组子的筛选 | 第57-58页 |
| ·突变酶Al-5和E6的组合突变 | 第58页 |
| ·突变酶在毕赤酵母系统中表达 | 第58-59页 |
| ·酵母表达突变酶的获得 | 第59-60页 |
| ·酵母表达突变酶的酶学性质分析 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-65页 |
| 第四章 全文结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 博士后个人简历 | 第76-77页 |
| 博士及博士后期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 博士后期间参加的项目 | 第78页 |