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人源CFI_m复合物识别pre-mRNA的分子机制及酵母Pub1蛋白结构的生物学研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-11页
第1章 绪论第11-33页
   ·pre-m RNA 的3’-端加工因子的研究进展第11-22页
     ·pre-mRNA 的加工成熟过程第11-12页
     ·pre-mRNA 的3’-端加工的重要性第12-13页
     ·哺乳动物pre-mRNA 的调控3’-端加工的序列元件第13-15页
     ·pre-mRNA 3’-端加工装置及蛋白因子第15-22页
   ·RNA 识别结构域的结构与功能第22-33页
     ·什么是RRM结构域?第22-23页
     ·RRM 结构域的结构第23-24页
     ·RRM-RNA 复合物结构第24-26页
     ·RRM 结构域具有高度可塑性从而获得高亲和力和特异性第26-29页
     ·RRM 结构域同样也参与蛋白-蛋白相互作用第29-33页
第2章 CFIm 复合物识pre-m RNA 的分子机制研究第33-69页
   ·CFIm 复合物的功能研究及结构生物学研究现状第33-34页
   ·实验材料和方法第34-41页
     ·基因克隆和表达质粒构建第34-37页
     ·CFI_m25-CFI_m68RRM 复合物表达和纯化第37-38页
     ·晶体生长和衍射数据收集第38页
     ·模型构建和结构修正第38-39页
     ·CFI_m25-CFI_m68RRM 复合物的生化性质与RNA 结合能力鉴定第39-41页
   ·实验结果第41-63页
     ·CFI_m25 与CFI_m68 相互作用的研究第41-43页
     ·CFI_m25-CFI_m68RRM 复合物的纯化第43页
     ·CFI_m25-CFI_m68RRM 的结构解析第43-45页
     ·CFI_m25-CFI_m68RRM 的总体结构第45-47页
     ·CFI_m68RRM 的结构第47-49页
     ·CFI_m25 与CFI_m68RRM 的相互作用界面第49-52页
     ·CFI_m25-CFI_m68RRM-RNA 的结构解析第52-54页
     ·UGUAA 的识别第54-58页
     ·突变实验数据支持这个新颖的结合模式第58-60页
     ·RNA 结合能力分析第60-62页
     ·不同种属多细胞动物多聚信使RNA 序列的统计学分析第62-63页
   ·结果讨论第63-69页
     ·CFI_m68RRM 与其他RRM 结构域的比较第63-64页
     ·CFI_m25 二聚化的重要性第64-65页
     ·CFI_m25 通过稳定CFI_m68 的L_3 loop 构象来使其结合RNA第65-66页
     ·CFI_m68 对于结合RNA 十分重要第66-69页
第3章 Pub1 的结构与功能研究第69-94页
   ·Pub1 的生物学功能第69-70页
   ·实验材料和方法第70-74页
     ·基因克隆和表达质粒构建第70-72页
     ·蛋白表达和纯化第72页
     ·晶体生长和衍射数据收集第72-73页
     ·模型构建和结构修正第73-74页
     ·Pub1 生化性质和RNA 结合能力鉴定第74页
   ·实验结果与讨论第74-94页
     ·Pub1-RRM2 和Pub1-RRM12 表达质粒构建,蛋白表达、纯化第74-76页
     ·Pub1-RRM2 的晶体学研究第76-78页
     ·Pub1-RRM12 的晶体学研究第78-81页
     ·Pub1-RRM1 和Pub1-RRM2 的结构第81-83页
     ·与其它RRM 结构域机构的比较第83-84页
     ·Pub1-RRM1 和Pub1-RRM2 的RNA 结合面及关键氨基酸残基第84-85页
     ·Pub1-RRM12 的结构第85-90页
     ·poly(U)结合能力的测定第90-91页
     ·Pub1-RRM12 结合poly(U)的的可能模式第91-93页
     ·Pub1 识别poly(U)的可能机制第93页
     ·小结第93-94页
结论第94-96页
参考文献第96-110页
致谢第110-112页
攻读学位期间发表的学术论文与取得的其他研究成果第112-113页

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