泰勒虫新型诊断方法的建立和未定种生物学特性研究
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 1. 文献综述 | 第15-34页 |
| ·泰勒虫分类学研究进展 | 第15-24页 |
| ·泰勒虫的发现 | 第16-17页 |
| ·泰勒虫的生活史 | 第17-18页 |
| ·泰勒虫的形态学特征 | 第18页 |
| ·致病性及组织分布 | 第18-19页 |
| ·致病特征 | 第19-20页 |
| ·血液学影响 | 第20-21页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第21页 |
| ·传播媒介和传播方式 | 第21-22页 |
| ·18S rRNA基因研究进展 | 第22-23页 |
| ·ITS基因研究进展 | 第23-24页 |
| ·MPSP基因研究进展 | 第24页 |
| ·泰勒虫诊断方法研究进展 | 第24-34页 |
| ·血涂片染色镜检 | 第25页 |
| ·间接荧光抗体试验(IFAT) | 第25页 |
| ·乳胶凝集试验(LAT) | 第25-26页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第26-27页 |
| ·PCR方法 | 第27-28页 |
| ·反向线性杂交(RLB) | 第28-29页 |
| ·环介导等温扩增技术(LAMP) | 第29-34页 |
| 2. 研究的目的与意义 | 第34-35页 |
| 3. 材料与方法 | 第35-51页 |
| ·试验材料 | 第35-38页 |
| ·虫株、菌株、质粒、载体、蜱和试验动物 | 第35-36页 |
| ·试剂及仪器 | 第36页 |
| ·主要试剂与溶液的配制 | 第36-38页 |
| ·琼脂糖胶鉴定相关试剂与缓冲液 | 第36页 |
| ·克隆相关试剂与缓冲液 | 第36-37页 |
| ·质粒小量提取相关试剂与缓冲液 | 第37页 |
| ·ELISA相关试剂与缓冲液 | 第37-38页 |
| ·其它试剂与缓冲液 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-51页 |
| ·血涂片的制备和染色镜检 | 第38页 |
| ·泰勒虫基因组的提取 | 第38-39页 |
| ·引物的设计 | 第39-42页 |
| ·LAMP和PCR反应体系及反应条件 | 第42-43页 |
| ·泰勒虫LAMP | 第42页 |
| ·瑟氏泰勒虫特异性LAMP | 第42页 |
| ·瑟氏泰勒虫特异性PCR | 第42页 |
| ·梨形虫ITS基因全长扩增 | 第42-43页 |
| ·梨形虫18S rRNA基因全长扩增 | 第43页 |
| ·水牛源泰勒虫未定种PCR扩增 | 第43页 |
| ·LAMP和PCR产物的鉴定 | 第43页 |
| ·LAMP和PCR反应条件的优化 | 第43-44页 |
| ·LAMP最佳反应温度的确定 | 第43页 |
| ·PCR复性温度的选择 | 第43-44页 |
| ·LAMP和PCR的特异性试验 | 第44页 |
| ·LAMP和PCR的敏感性试验 | 第44页 |
| ·PCR产物纯化及连接 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第45页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第45-46页 |
| ·酶切鉴定 | 第46页 |
| ·序列分析与系统发生树的建立 | 第46-48页 |
| ·LAMP、PCR方法的临床应用 | 第48页 |
| ·统计学方法 | 第48页 |
| ·洁净蜱的饲养 | 第48页 |
| ·动物实验 | 第48-50页 |
| ·水牛源泰勒虫未定种感染黄牛试验 | 第48页 |
| ·水牛源泰勒虫未定种感染水牛试验 | 第48-49页 |
| ·蜱传播实验 | 第49-50页 |
| ·ELISA操作方法 | 第50-51页 |
| 4. 结果和分析 | 第51-89页 |
| ·泰勒虫血清学调查 | 第51-53页 |
| ·梨形虫LAMP方法的建立 | 第53-56页 |
| ·梨形虫LAMP扩增产物的检测结果 | 第53-54页 |
| ·梨形虫LAMP反应最佳温度的确定 | 第54页 |
| ·梨形虫LAMP反应的敏感性 | 第54-55页 |
| ·梨形虫LAMP反应的特异性 | 第55-56页 |
| ·瑟氏泰勒虫LAMP方法的建立和应用 | 第56-60页 |
| ·LAMP扩增产物的检测结果 | 第56-57页 |
| ·LAMP反应最佳温度的确定 | 第57-58页 |
| ·LAMP反应的敏感性 | 第58页 |
| ·LAMP反应的特异性 | 第58-59页 |
| ·LAMP的临床应用 | 第59-60页 |
| ·瑟氏泰勒虫PCR方法的建立和应用 | 第60-62页 |
| ·最佳复性温度的确定 | 第60页 |
| ·PCR特异性试验结果 | 第60-61页 |
| ·PCR敏感性结果 | 第61-62页 |
| ·PCR的临床应用 | 第62页 |
| ·梨形虫ITS基因的克隆和测序 | 第62-68页 |
| ·巢式PCR筛选梨形虫阳性样品 | 第62页 |
| ·巢式PCR扩增梨形虫ITS基因 | 第62-64页 |
| ·ITS基因序列分析和进化树构建 | 第64-68页 |
| ·泰勒虫18S rRNA基因的克隆和测序 | 第68-70页 |
| ·PCR扩增泰勒虫18S rRNA基因 | 第68页 |
| ·泰勒虫18S rRNA基因序列分析 | 第68-70页 |
| ·水牛源泰勒虫未定种特异性PCR方法的建立和应用 | 第70-73页 |
| ·最佳复性温度的确定 | 第70-71页 |
| ·PCR特异性试验结果 | 第71页 |
| ·PCR敏感性结果 | 第71-73页 |
| ·临床样品的检测 | 第73页 |
| ·水牛源泰勒虫未定种感染试验 | 第73-88页 |
| ·水牛源泰勒虫未定种感染黄牛试验 | 第73页 |
| ·水牛源泰勒虫未定种感染水牛试验 | 第73-88页 |
| ·体温变化 | 第75-76页 |
| ·白细胞计数 | 第76页 |
| ·淋巴细胞计数 | 第76-77页 |
| ·淋巴细胞比例 | 第77页 |
| ·中值细胞计数 | 第77-78页 |
| ·中值细胞比例 | 第78页 |
| ·粒细胞计数 | 第78-79页 |
| ·粒细胞比例 | 第79页 |
| ·红细胞计数 | 第79-80页 |
| ·红细胞压积 | 第80页 |
| ·红细胞平均体积 | 第80-81页 |
| ·血红蛋白 | 第81页 |
| ·红细胞宽度变异数 | 第81-82页 |
| ·红细胞平均血红蛋白 | 第82页 |
| ·平均血红蛋白浓度 | 第82-83页 |
| ·血小板 | 第83页 |
| ·谷丙转氨酶 | 第83-84页 |
| ·谷草转氨酶 | 第84页 |
| ·碱性磷酸酶 | 第84-85页 |
| ·肌酸激酶 | 第85页 |
| ·乳酸脱氢酶 | 第85-86页 |
| ·总胆红素 | 第86页 |
| ·直接胆红素 | 第86-87页 |
| ·间接胆红素 | 第87页 |
| ·尿素氮 | 第87-88页 |
| ·血糖 | 第88页 |
| ·蜱传播实验 | 第88-89页 |
| 5. 讨论与结论 | 第89-94页 |
| ·讨论 | 第89-93页 |
| ·泰勒虫血清学调查 | 第89页 |
| ·梨形虫LAMP方法的建立 | 第89-90页 |
| ·瑟氏泰勒虫LAMP和PCR应用及分析 | 第90页 |
| ·分子分类学分析 | 第90-91页 |
| ·水牛源泰勒虫未定种流行病学调查 | 第91-92页 |
| ·动物感染试验 | 第92-93页 |
| ·洁净蜱的饲养和蜱传播试验 | 第93页 |
| ·结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 附录1 | 第107-110页 |
| 附录2 | 第110页 |
