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环介导等温扩增(LAMP)技术检测猪肉中单核增生性李斯特氏菌的研究

摘要第1-5页
Abstract第5-10页
1 引言第10-28页
   ·立题背景及意义第10-11页
   ·单增李斯特的简介第11-16页
     ·单增李斯特的分类第11页
     ·单增李斯特的生物学特征第11-13页
     ·抗原构造及血清型第13页
     ·单增李斯特的致病因子第13-14页
     ·单增李斯特的流行病学第14-16页
   ·单增李斯特菌研究现状第16-18页
     ·传统分离鉴定方法第16页
     ·免疫学检测方法第16-17页
     ·分子生物学检测方法第17-18页
   ·环介导等温扩增(LAMP)技术第18-27页
     ·LAMP 法的概述第18页
     ·LAMP 法的特点第18-19页
     ·LAMP 法的引物设计第19-21页
     ·LAMP 法的基本原理第21-24页
     ·LAMP 法产物的检测方法第24-25页
     ·LAMP 法的应用第25-27页
   ·研究内容第27-28页
2 材料与方法第28-38页
   ·试验材料与仪器第28-29页
     ·试验菌株第28页
     ·仪器与设备第28-29页
     ·主要培养基第29页
   ·试验方法第29-31页
     ·菌种的培养第29页
     ·细菌 DNA 模板的提取第29-31页
   ·LAMP 引物设计及LAMP 主要操作第31-32页
     ·引物设计第31-32页
     ·LAMP 和PCR 反应体系第32页
     ·LAMP 和PCR 主要操作程序第32页
   ·LAMP 反应条件优化第32-33页
     ·适宜镁离子浓度选择第32页
     ·Bst DNA 聚合酶对试验结果的影响第32-33页
     ·适宜dNTPs 浓度选择第33页
     ·反应时间的优化第33页
     ·反应温度的优化第33页
     ·引物缺省的试验第33页
   ·LAMP 引物特异性的检测第33页
   ·LAMP 扩增产物的分析第33-34页
     ·LAMP 产物的可视结果分析第33-34页
     ·LAMP 产物的凝胶成像分析第34页
   ·单增李斯特菌的灵敏度检测第34页
     ·LAMP 反应的灵敏度检测第34页
     ·PCR 反应的灵敏度检测第34页
   ·人工污染猪肉中单增李斯特菌模板 DNA 提取方法的比较第34-36页
     ·普通热裂解法第34-35页
     ·化学试剂法第35页
     ·试剂盒法(85423 细菌基因组DNA 提取试剂盒)第35-36页
     ·FTA 滤膜法第36页
   ·人工污染猪肉中单增李斯特菌的检出限第36-38页
     ·人工污染猪肉中单增李斯特菌的DNA 提取第36-37页
     ·LAMP 的检出限第37页
     ·PCR 的检出限第37-38页
3 结果与分析第38-47页
   ·LAMP 反应条件的优化第38-41页
     ·Mg~(2+)浓度的优化第38页
     ·Bst DNA 聚合酶的优化第38-39页
     ·dNTPs 浓度的优化第39页
     ·反应时间的优化第39-40页
     ·反应温度的优化第40页
     ·引物缺省试验第40-41页
   ·引物特异性的研究第41-42页
     ·LAMP 引物特异性的研究第41-42页
   ·PCR 产物测序第42页
   ·LAMP 扩增产物的分析第42-43页
     ·LAMP 扩增的可视结果分析第42页
     ·LAMP 扩增产物的电泳分析第42-43页
   ·单增李斯特菌纯培养灵敏度的研究第43-44页
     ·LAMP 检测单增李斯特菌的灵敏度第43-44页
     ·PCR 检测单增李斯特菌的灵敏度第44页
   ·猪肉中单增李斯特菌 DNA 提取方法比较第44-45页
   ·人工污染猪肉中单增李斯特菌检出限的研究第45-47页
     ·LAMP 检测人工污染猪肉中单增李斯特菌的检出限第45页
     ·PCR 检测人工污染猪肉中单增李斯特菌的检出限第45-47页
4 讨论第47-50页
   ·环介导等温扩增(LAMP)方法检测单增李斯特菌方法学评价第47-48页
   ·靶基因的选择第48页
   ·LAMP 引物的确定第48页
   ·LAMP 反应条件的优化第48-49页
     ·镁离子(M92+)浓度第48页
     ·dNTPs 浓度第48页
     ·DNA 聚合酶第48-49页
   ·LAMP 的污染防控第49-50页
5 结论第50-51页
参考文献第51-57页
硕士期间发表学术论文第57-58页
作者简介第58-59页
致谢第59-60页

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