摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-10页 |
1 引言 | 第10-28页 |
·立题背景及意义 | 第10-11页 |
·单增李斯特的简介 | 第11-16页 |
·单增李斯特的分类 | 第11页 |
·单增李斯特的生物学特征 | 第11-13页 |
·抗原构造及血清型 | 第13页 |
·单增李斯特的致病因子 | 第13-14页 |
·单增李斯特的流行病学 | 第14-16页 |
·单增李斯特菌研究现状 | 第16-18页 |
·传统分离鉴定方法 | 第16页 |
·免疫学检测方法 | 第16-17页 |
·分子生物学检测方法 | 第17-18页 |
·环介导等温扩增(LAMP)技术 | 第18-27页 |
·LAMP 法的概述 | 第18页 |
·LAMP 法的特点 | 第18-19页 |
·LAMP 法的引物设计 | 第19-21页 |
·LAMP 法的基本原理 | 第21-24页 |
·LAMP 法产物的检测方法 | 第24-25页 |
·LAMP 法的应用 | 第25-27页 |
·研究内容 | 第27-28页 |
2 材料与方法 | 第28-38页 |
·试验材料与仪器 | 第28-29页 |
·试验菌株 | 第28页 |
·仪器与设备 | 第28-29页 |
·主要培养基 | 第29页 |
·试验方法 | 第29-31页 |
·菌种的培养 | 第29页 |
·细菌 DNA 模板的提取 | 第29-31页 |
·LAMP 引物设计及LAMP 主要操作 | 第31-32页 |
·引物设计 | 第31-32页 |
·LAMP 和PCR 反应体系 | 第32页 |
·LAMP 和PCR 主要操作程序 | 第32页 |
·LAMP 反应条件优化 | 第32-33页 |
·适宜镁离子浓度选择 | 第32页 |
·Bst DNA 聚合酶对试验结果的影响 | 第32-33页 |
·适宜dNTPs 浓度选择 | 第33页 |
·反应时间的优化 | 第33页 |
·反应温度的优化 | 第33页 |
·引物缺省的试验 | 第33页 |
·LAMP 引物特异性的检测 | 第33页 |
·LAMP 扩增产物的分析 | 第33-34页 |
·LAMP 产物的可视结果分析 | 第33-34页 |
·LAMP 产物的凝胶成像分析 | 第34页 |
·单增李斯特菌的灵敏度检测 | 第34页 |
·LAMP 反应的灵敏度检测 | 第34页 |
·PCR 反应的灵敏度检测 | 第34页 |
·人工污染猪肉中单增李斯特菌模板 DNA 提取方法的比较 | 第34-36页 |
·普通热裂解法 | 第34-35页 |
·化学试剂法 | 第35页 |
·试剂盒法(85423 细菌基因组DNA 提取试剂盒) | 第35-36页 |
·FTA 滤膜法 | 第36页 |
·人工污染猪肉中单增李斯特菌的检出限 | 第36-38页 |
·人工污染猪肉中单增李斯特菌的DNA 提取 | 第36-37页 |
·LAMP 的检出限 | 第37页 |
·PCR 的检出限 | 第37-38页 |
3 结果与分析 | 第38-47页 |
·LAMP 反应条件的优化 | 第38-41页 |
·Mg~(2+)浓度的优化 | 第38页 |
·Bst DNA 聚合酶的优化 | 第38-39页 |
·dNTPs 浓度的优化 | 第39页 |
·反应时间的优化 | 第39-40页 |
·反应温度的优化 | 第40页 |
·引物缺省试验 | 第40-41页 |
·引物特异性的研究 | 第41-42页 |
·LAMP 引物特异性的研究 | 第41-42页 |
·PCR 产物测序 | 第42页 |
·LAMP 扩增产物的分析 | 第42-43页 |
·LAMP 扩增的可视结果分析 | 第42页 |
·LAMP 扩增产物的电泳分析 | 第42-43页 |
·单增李斯特菌纯培养灵敏度的研究 | 第43-44页 |
·LAMP 检测单增李斯特菌的灵敏度 | 第43-44页 |
·PCR 检测单增李斯特菌的灵敏度 | 第44页 |
·猪肉中单增李斯特菌 DNA 提取方法比较 | 第44-45页 |
·人工污染猪肉中单增李斯特菌检出限的研究 | 第45-47页 |
·LAMP 检测人工污染猪肉中单增李斯特菌的检出限 | 第45页 |
·PCR 检测人工污染猪肉中单增李斯特菌的检出限 | 第45-47页 |
4 讨论 | 第47-50页 |
·环介导等温扩增(LAMP)方法检测单增李斯特菌方法学评价 | 第47-48页 |
·靶基因的选择 | 第48页 |
·LAMP 引物的确定 | 第48页 |
·LAMP 反应条件的优化 | 第48-49页 |
·镁离子(M92+)浓度 | 第48页 |
·dNTPs 浓度 | 第48页 |
·DNA 聚合酶 | 第48-49页 |
·LAMP 的污染防控 | 第49-50页 |
5 结论 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-57页 |
硕士期间发表学术论文 | 第57-58页 |
作者简介 | 第58-59页 |
致谢 | 第59-60页 |