| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一部分 引言 | 第9-17页 |
| 1.1 多能成体干细胞分化研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1.1 研究历史和概况 | 第9页 |
| 1.1.2 成体干细胞与微环境 | 第9-10页 |
| 1.1.3 干细胞的多能性和分化控制 | 第10-11页 |
| 1.2 果蝇肠道作为干细胞研究的进展 | 第11-14页 |
| 1.2.1 研究进展概述 | 第11页 |
| 1.2.2 果蝇中肠的细胞组成与特点 | 第11-13页 |
| 1.2.3 成体肠道干细胞的来源与特化 | 第13页 |
| 1.2.4 各生理状态中各种信号通路对肠道干细胞的调控 | 第13-14页 |
| 1.3 果蝇肠道干细胞的品系分化的研究 | 第14-17页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第17-46页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第17-21页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第17页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.1.3 抗体与血清 | 第18-19页 |
| 2.1.4 材料与试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.5 测序结果数据分析软件 | 第21页 |
| 2.2 果蝇的培养和交配条件概括 | 第21-22页 |
| 2.2.1 培养果蝇食物 | 第21页 |
| 2.2.2 杂交与培养环境 | 第21-22页 |
| 2.3 遗传操作介绍 | 第22-26页 |
| 2.3.1 Gal4/UAS系统 | 第22-24页 |
| 2.3.2 基于FLP/FRT系统的细胞命运追踪 | 第24-25页 |
| 2.3.3 抑制型的细胞标记的嵌合体分析(Mosaic analysis with a repressible cell marker,简称MARCM) | 第25-26页 |
| 2.4 实验操作 | 第26-29页 |
| 2.4.1 免疫荧光染色 | 第26-28页 |
| 2.4.2 成像技术 | 第28页 |
| 2.4.3 BrdU标记 | 第28-29页 |
| 2.4.4 数据统计与实验重复性 | 第29页 |
| 2.5 肠干细胞的转录组测序与分析 | 第29-42页 |
| 2.5.1 荧光激活细胞分选技术(FACS) | 第31-32页 |
| 2.5.2 RNA提取 | 第32页 |
| 2.5.3 RNA扩增 | 第32-39页 |
| 2.5.4 cDNA文库构建与测序 | 第39-40页 |
| 2.5.5 转录组测序结果分析 | 第40-42页 |
| 2.6 DNA腺嘌呤甲基转移酶鉴定(DNA adenine methyltransferase identification,DamID)实验 | 第42-46页 |
| 2.6.1 组织样品准备部分 | 第42-43页 |
| 2.6.2 gDNA 提取 | 第43页 |
| 2.6.3 Dpn Ⅱ限制酶消化,以及碱性磷酸酶(AP)处理 | 第43-44页 |
| 2.6.4 Dpn I限制酶消化 | 第44页 |
| 2.6.5 适配序列(Adaptor)连接反应 | 第44页 |
| 2.6.6 连接子介导的(LM) PCR反应 | 第44-45页 |
| 2.6.7 T7核酸外切酶处理 | 第45页 |
| 2.6.8 DNA样品打断以及测序分析 | 第45页 |
| 2.6.9 ChIP-seq结果的分析 | 第45-46页 |
| 第三部分 实验结果 | 第46-77页 |
| 3.1 EE从头再生分析实验揭示ISC在产生EE前进行了一次自我更新 | 第46-48页 |
| 3.2 干细胞中过表达Scute诱导的EE命运决定的过程分析 | 第48-54页 |
| 3.3 Scute在ISC中呈现动态表达模式 | 第54-57页 |
| 3.4 表达高水平Scute的ISC细胞命运是EE | 第57-61页 |
| 3.5 Notch突变的ISC中Scute表达水平升高,导致过量EE的产生 | 第61-63页 |
| 3.6 Scute在ISC中瞬时表达的机制 | 第63-73页 |
| 3.6.1 Sc表达并不受ISC中Slit-Robo2信号影响 | 第63-64页 |
| 3.6.2 Scute与E(spl)基因之间构成一个负反馈调节环路 | 第64-71页 |
| 3.6.3 Scute通过转录水平的自激活实现表达在ISC中的上调 | 第71-73页 |
| 3.7 Sc的瞬时激活介导了虫蛹阶段EE细胞的批量产生 | 第73-77页 |
| 第四部分 总结与讨论 | 第77-81页 |
| 4.1 细胞命运决定蛋白在多能干细胞中瞬时表达 | 第77-78页 |
| 4.2 EEP中Notch信号被抑制的机制 | 第78页 |
| 4.3 特定品系的前体细胞在终末分化前分裂次数的决定机制 | 第78-79页 |
| 4.4 Sc在ISC中实现瞬时性表达的机制 | 第79-81页 |
| 第五部分 补充数据列表 | 第81-87页 |
| 表5.1 | 第81-82页 |
| 表5.2 | 第82-83页 |
| 表5.3 | 第83-85页 |
| 表5.4 | 第85-87页 |
| 第六部分 参考文献 | 第87-94页 |
| 第七部分 致谢 | 第94-96页 |
