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FOXC1通过转录激活ITGA7和FGFR4的表达促进结直肠癌转移的机制研究

缩略语表第7-9页
中文摘要第9-13页
ABSTRACT第13-17页
前言第18-20页
文献回顾第20-36页
第一部分 FOXC1在人结直肠癌组织中的表达及与预后的关系第36-51页
    1 材料第37-39页
        1.1 主要试剂和耗材第37-38页
        1.2 主要仪器第38页
        1.3 组织标本第38-39页
    2 方法第39-40页
        2.1 qRT-PCR第39页
        2.2 免疫组织化学染色第39-40页
        2.3 统计分析第40页
    3 结果第40-47页
        3.1 FOXC1mRNA在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织及正常肠粘膜组织第40-41页
        3.2 FOXC1mRNA在复发患者癌组织中的表达显著高于未复发患者癌组织第41-42页
        3.3 FOXC1mRNA在转移患者原发灶组织中的表达显著高于未转移患者原发灶组织第42-43页
        3.4 FOXC1mRNA在转移灶中的表达显著高于原发灶组织第43页
        3.5 FOXC1在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织第43-44页
        3.6 FOXC1的表达与结直肠癌患者临床病理参数显著相关第44-45页
        3.7 FOXC1的表达与结直肠癌患者的生存和复发显著相关,并且是结直肠癌患者复发和预后不良的独立预测因素第45-47页
    4 讨论第47-51页
第二部分 FOXC1促进结直肠癌细胞侵袭和转移第51-63页
    1 材料第52-53页
        1.1 细胞系第52页
        1.2 实验动物第52页
        1.3 主要试剂和材料第52页
        1.4 主要仪器第52-53页
    2 方法第53-55页
        2.1 细胞培养第53页
        2.2 蛋白免疫印迹第53页
        2.3 慢病毒的设计和包装第53页
        2.4 稳定感染细胞系的建立第53-54页
        2.5 qRT-PCR第54页
        2.6 Transwell迁移和侵袭实验第54页
        2.7 构建荧光素酶标记的细胞系第54页
        2.8 裸鼠尾静脉转移实验第54页
        2.9 裸鼠活体成像实验第54页
        2.10 统计学分析第54-55页
    3 结果第55-60页
        3.1 FOXC1在高转移潜能结直肠癌细胞系中的表达显著高于低转移潜能结直肠癌细胞系第55-56页
        3.2 体外实验中,在高转移潜能细胞系中下调FOXC1的表达抑制细胞的转移能力,在低转移潜能细胞系中上调FOXC1的表达增强细胞的转移能力第56-58页
        3.3 体内实验中,在高转移潜能细胞系中下调FOXC1的表达抑制细胞的转移能力,在低转移潜能细胞系中上调FOXC1的表达增强细胞的转移能力第58-60页
    4 讨论第60-63页
第三部分 ITGA7和FGFR4是FOXC1的直接转录激活靶基因第63-76页
    1 材料第63-64页
        1.1 细胞系第63-64页
        1.2 主要试剂和材料第64页
        1.3 主要仪器第64页
    2 方法第64-66页
        2.1 细胞培养第64页
        2.2 蛋白免疫印迹第64页
        2.3 qRT-PCR第64页
        2.4 ChIP实验第64-65页
        2.5 PCRarray第65页
        2.6 质粒构建第65页
        2.7 报告基因转染及Luciferase检测第65页
        2.8 统计学分析第65-66页
    3 结果第66-72页
        3.1 上调FOXC1的表达促进ITGA7和FGFR4的表达,下调FOXC1的表达抑制ITGA7和FGFR4的表达第66-70页
        3.2 ITGA7和FGFR4启动子区域FOXC1结合位点的确认第70-72页
        3.3 ITGA7和FGFR4是FOXC1的直接靶基因第72页
    4 讨论第72-76页
第四部分 FOXC1通过上调ITGA7和FGFR4的表达促进结直肠癌细胞的转移第76-92页
    1 材料第76-77页
        1.1 细胞系第76页
        1.2 实验动物第76页
        1.3 主要试剂和材料第76-77页
        1.4 主要仪器第77页
    2 方法第77-78页
        2.1 细胞培养第77页
        2.2 蛋白免疫印迹第77页
        2.3 慢病毒的设计和包装第77-78页
        2.4 稳定感染细胞系的建立第78页
        2.5 Transwell迁移和侵袭实验第78页
        2.6 构建荧光素酶标记的细胞系第78页
        2.7 裸鼠尾静脉转移实验第78页
        2.8 裸鼠活体成像实验第78页
        2.9 统计学分析第78页
    3 结果第78-89页
        3.1 在上调FOXC1表达的细胞系中下调ITGA7和FGFR4的表达,在下调FOXC1表达的细胞系中上调ITGA7和FGFR4的表达及验证第78-79页
        3.2 体外实验中,在上调FOXC1表达的细胞系中下调ITGA7和FGFR4的表达抑制细胞的转移能力,在下调FOXC1表达的细胞系中上调ITGA7和FGFR4的表达增强细胞的转移能力第79-83页
        3.3 体内实验中,在上调FOXC1表达的细胞系中下调ITGA7和FGFR4的表达抑制细胞的转移能力,在下调FOXC1表达的细胞系中上调ITGA7和FGFR4的表达增强细胞的转移能力第83-87页
        3.4 FGFR4的特异性抑制剂BLU9931能够拮抗其促进结直肠癌转移的作用第87-89页
    4 讨论第89-92页
第五部分 FOXC1在人结直肠癌组织中的表达与ITGA7和FGFR4的表达呈正相关第92-101页
    1 材料第92-93页
        1.1 主要试剂和耗材第92页
        1.2 主要仪器第92-93页
        1.3 组织标本第93页
    2 方法第93页
        2.1 免疫组织化学染色第93页
        2.2 统计分析第93页
    3 结果第93-99页
        3.1 在人结直肠癌组织中ITGA7和FGFR4的表达与FOXC1的表达呈正相关第93-94页
        3.2 ITGA7和FGFR4的高表达与结直肠癌患者的临床病理参数相关第94-96页
        3.3 ITGA7和FGFR4的高表达与结直肠癌患者的复发和生存相关第96-97页
        3.4 FOXC1/ITGA7和FOXC1/FGFR4双阳性表达的患者预后不良第97-99页
    4 讨论第99-101页
小结第101-103页
参考文献第103-124页
附录第124-127页
个人简历和研究成果第127-128页
致谢第128-129页

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