| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 本论文主要创新点 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-37页 |
| §1.1 糖基化 | 第14-17页 |
| 1.1.1 糖基化的类型 | 第14-16页 |
| 1.1.2 糖基化的生物学意义 | 第16-17页 |
| §1.2 细胞唾液酸化 | 第17-23页 |
| 1.2.1 唾液酸简介 | 第17页 |
| 1.2.2 唾液酸的生物合成及相关酶 | 第17-20页 |
| 1.2.3 唾液酸的生物学意义 | 第20-21页 |
| 1.2.4 唾液酸化相关酶的生物学意义 | 第21-23页 |
| 1.2.4.1 唾液酸转移酶在肿瘤细胞中的作用 | 第21-22页 |
| 1.2.4.2 唾液酸酶与肿瘤的发展 | 第22-23页 |
| §1.3 细胞唾液酸化相关酶的检测 | 第23-29页 |
| 1.3.1 唾液酸转移酶的检测 | 第23-26页 |
| 1.3.2 唾液酸酶的检测 | 第26-29页 |
| §1.4 本论文的主要研究工作 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-37页 |
| 第二章 基于化学选择性识别的活细胞内唾液酸转移酶活性检测 | 第37-63页 |
| §2.1 引言 | 第38-40页 |
| §2.2 材料和方法 | 第40-44页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第40页 |
| 2.2.2 仪器设备 | 第40页 |
| 2.2.3 细胞培养和处理 | 第40-41页 |
| 2.2.4 去唾液酸去半乳糖胎球蛋白的制备 | 第41页 |
| 2.2.5 TRITC标记蛋白的制备 | 第41页 |
| 2.2.6 FITC-APBA的合成 | 第41-42页 |
| 2.2.7 FITC-APBA和TRITC标记蛋白的FRET体外验证 | 第42页 |
| 2.2.8 唾液酸转移酶对TRITC-AF的底物耐受性 | 第42页 |
| 2.2.9 TRITC标记蛋白和FITC-APBA的细胞内载运 | 第42页 |
| 2.2.10 亚细胞共定位 | 第42-43页 |
| 2.2.11 细胞内FRET信号的验证 | 第43页 |
| 2.2.12 基于FRET成像的细胞内唾液酸转移酶活性检测 | 第43页 |
| 2.2.13 唾液酸化抑制实验 | 第43-44页 |
| 2.2.14 细胞表面唾液酸的检测 | 第44页 |
| §2.3 结果与讨论 | 第44-59页 |
| 2.3.1 TRITC标记蛋白和FITC-APBA的表征 | 第44-45页 |
| 2.3.2 FITC-APBA和TRITC标记蛋白的FRET体外验证 | 第45-47页 |
| 2.3.3 唾液酸转移酶介导的TRITC-AF唾液酸化体外实验 | 第47页 |
| 2.3.4 TRITC标记蛋白和FITC-APBA细胞内载运 | 第47-50页 |
| 2.3.5 细胞内FRET信号验证 | 第50-51页 |
| 2.3.6 活细胞内唾液酸转移酶活性检测 | 第51-57页 |
| 2.3.7 讨论 | 第57-59页 |
| §2.4 结论 | 第59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 第三章 中性pH荧光增强型成像用于监测活细胞内溶酶体唾液酸酶活性 | 第63-88页 |
| §3.1 引言 | 第64-66页 |
| §3.2 材料和方法 | 第66-72页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第66-67页 |
| 3.2.2 仪器设备 | 第67页 |
| 3.2.3 细胞培养和处理 | 第67-68页 |
| 3.2.4 Linker/BPEI/GO纳米复合物的制备 | 第68页 |
| 3.2.5 纳米探针的制备 | 第68页 |
| 3.2.6 唾液酸酶对4MUNA的酶切割及中性pH增强荧光的产生 | 第68页 |
| 3.2.7 APBA与4MUNA的共价结合对底物特异性的影响 | 第68-69页 |
| 3.2.8 唾液酸酶对纳米探针上4MUNA的酶切割 | 第69页 |
| 3.2.9 纳米探针对唾液酸酶的响应特异性 | 第69页 |
| 3.2.10 Linker/BPEI/GO对游离4MU荧光性质的影响 | 第69页 |
| 3.2.11 纳米探针经唾液酸酶切割后产物的MALDI-TOF质谱表征 | 第69-70页 |
| 3.2.12 溶酶体裂解液的制备 | 第70页 |
| 3.2.13 溶酶体裂解液中唾液酸酶活性的检测 | 第70页 |
| 3.2.14 探针在复杂细胞内环境中的稳定性 | 第70-71页 |
| 3.2.15 纳米复合物荧光共定位分析实验 | 第71页 |
| 3.2.16 纳米探针与细胞孵育的荧光成像实验 | 第71-72页 |
| 3.2.17 细胞与探针孵育后的活性测定 | 第72页 |
| 3.2.18 流式细胞分析实验 | 第72页 |
| §3.3 结果与讨论 | 第72-85页 |
| 3.3.1 纳米探针的表征 | 第72-74页 |
| 3.3.2 纳米探针的PASE修饰浓度优化 | 第74-75页 |
| 3.3.3 纳米探针的BPEI修饰浓度优化 | 第75-76页 |
| 3.3.4 4MUNA对唾液酸酶活性的荧光响应 | 第76-78页 |
| 3.3.5 纳米探针对唾液酸酶的响应特异性 | 第78-79页 |
| 3.3.6 溶酶体裂解液唾液酸酶活性检测 | 第79-80页 |
| 3.3.7 细胞内纳米探针共定位及溶酶体唾液酸酶活性的检测 | 第80-83页 |
| 3.3.8 利用纳米探针监测细胞内溶酶体唾液酸酶活性变化 | 第83-85页 |
| §3.4 结论 | 第85页 |
| 参考文献 | 第85-88页 |
| 附录 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
