| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 材料 | 第12-19页 |
| 1.1 三丁基锡（Tributyltin, TBT） | 第12页 |
| 1.2 实验用细胞系 | 第12页 |
| 1.3 主要试剂 | 第12-14页 |
| 1.4 主要实验耗材 | 第14-15页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第15页 |
| 1.6 细胞培养用液 | 第15-16页 |
| 1.6.1 10%血清的完全培养基（V/V） | 第15-16页 |
| 1.6.2 磷酸盐缓冲液（phosphate bufferd saline，PBS） | 第16页 |
| 1.6.3 胰蛋白酶消化液 | 第16页 |
| 1.6.4 细胞冻存液 | 第16页 |
| 1.6.5 细胞裂解液 | 第16页 |
| 1.7 MTT细胞工作液 | 第16页 |
| 1.8 PCR相关用液 | 第16-17页 |
| 1.8.1 0.1%DEPC水 | 第16页 |
| 1.8.2 引物储备液 | 第16页 |
| 1.8.3 1×TAE缓冲溶液 | 第16-17页 |
| 1.8.4 1%琼脂糖凝胶液 | 第17页 |
| 1.8.5 2.5%琼脂糖凝胶液 | 第17页 |
| 1.9 BSA蛋白标准液 | 第17页 |
| 1.10 Western-Blot相关用液 | 第17-19页 |
| 1.10.1 30%丙烯酰胺溶液 | 第17页 |
| 1.10.2 1.0mMTris-HCl溶液（PH=6.8） | 第17页 |
| 1.10.3 1.5mMTris-HCl溶液（PH=8.8） | 第17页 |
| 1.10.4 10%过硫酸铵溶液（AP） | 第17页 |
| 1.10.5 10%十二烷基磺酸钠溶液（SDS） | 第17页 |
| 1.10.6 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 | 第17页 |
| 1.10.7 1×转膜缓冲液 | 第17-18页 |
| 1.10.8 TBST缓冲液 | 第18页 |
| 1.10.9 5×丽春红染色液 | 第18页 |
| 1.10.10 封闭液/二抗稀释液 | 第18页 |
| 1.10.11 一抗稀释液 | 第18-19页 |
| 2 方法 | 第19-31页 |
| 2.1 细胞培养与处理 | 第19-20页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第19页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第19页 |
| 2.1.3 细胞冻存 | 第19页 |
| 2.1.4 细胞计数 | 第19-20页 |
| 2.2 MTT法检测细胞增殖 | 第20页 |
| 2.3 蛋白组学和数据分析 | 第20-22页 |
| 2.3.1 i TRAQ定量分析蛋白质组学实验过程 | 第20-22页 |
| 2.3.2 原始质谱数据 | 第22页 |
| 2.3.3 数据库检索 | 第22页 |
| 2.4 总RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.5 RNA质量鉴定 | 第23页 |
| 2.5.1 RNA浓度及纯度测定 | 第23页 |
| 2.5.2 RNA变性琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.6 逆转录合成cDNA | 第23-24页 |
| 2.7 引物设计和合成 | 第24-25页 |
| 2.8 普通PCR | 第25-26页 |
| 2.8.1 PCR体系 | 第25页 |
| 2.8.2 PCR反应扩增条件 | 第25-26页 |
| 2.8.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.9 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.9.1 实时荧光定量PCR体系 | 第26-27页 |
| 2.9.2 实时荧光定量PCR数据分析 | 第27页 |
| 2.10 总蛋白提取及定量 | 第27-28页 |
| 2.10.1 总蛋白提取 | 第27页 |
| 2.10.2 BCA法测样品中蛋白含量 | 第27-28页 |
| 2.11 Western Blot法检测蛋白表达水平 | 第28-30页 |
| 2.11.1 SDS-PAGE凝胶制备 | 第28-29页 |
| 2.11.2 蛋白样品准备及上样 | 第29页 |
| 2.11.3 电泳 | 第29页 |
| 2.11.4 转膜 | 第29页 |
| 2.11.5 丽春红染色 | 第29页 |
| 2.11.6 封闭 | 第29页 |
| 2.11.7 一抗孵育 | 第29页 |
| 2.11.8 二抗孵育 | 第29-30页 |
| 2.11.9 曝光及成像 | 第30页 |
| 2.12 电镜下检测细胞超微结构的改变 | 第30-31页 |
| 2.12.1 细胞样品收集 | 第30页 |
| 2.12.2 透射电镜生物样品制备及镜下观察 | 第30-31页 |
| 2.13 统计学分析 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-48页 |
| 3.1 TBT影响HL7702细胞的增殖 | 第31-32页 |
| 3.2 蛋白组学聚类分析 | 第32-33页 |
| 3.3 蛋白质组结果 | 第33-37页 |
| 3.3.1 蛋白质组结果总体情况 | 第33-34页 |
| 3.3.2 HL7702细胞暴露于低浓度TBT后的蛋白表达 | 第34页 |
| 3.3.3 HL7702细胞暴露于中浓度TBT后的蛋白表达 | 第34-35页 |
| 3.3.4 HL7702细胞暴露于高浓度TBT后的蛋白表达 | 第35-36页 |
| 3.3.5 蛋白质组结果总结 | 第36-37页 |
| 3.4 TBT诱导XBP1剪切 | 第37页 |
| 3.5 TBT对内质网应激反应相关基因表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.6 TBT对内质网应激反应相关蛋白表达的影响 | 第38-46页 |
| 3.7 TBT对细胞超微结构的影响 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-53页 |
| 4.1 TBT对HL7702细胞增殖的影响 | 第48页 |
| 4.2 TBT对HL7702细胞形态和超微结构的影响 | 第48-49页 |
| 4.3 TBT诱导HL7702细胞发生内质网应激 | 第49页 |
| 4.4 TBT激活HL7702细胞中的PERK-eIF2α通路 | 第49-50页 |
| 4.5 TBT激活ATF6介导的内质网应激信号通路 | 第50页 |
| 4.6 TBT激活HL7702细胞中的IRE1-XBP1通路 | 第50-51页 |
| 4.7 TBT下调部分内质网分子伴侣蛋白 | 第51-52页 |
| 4.8 TBT诱导PERK/eIF2α依赖的促凋亡转录因子CHOP激活 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 在学研究成果 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
