| 英文缩略对照 | 第11-13页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第17-40页 |
| 1.1 RNA PolⅡ控制的基因转录调控 | 第17-21页 |
| 1.1.1 RNA Pol Ⅱ的结构 | 第17-18页 |
| 1.1.2 RNA Pol Ⅱ CTD的活性调控 | 第18-19页 |
| 1.1.3 真核基因转录循环 | 第19-21页 |
| 1.2 P-TEFb复合体的发现、结构、功能以及活性调控机制 | 第21-27页 |
| 1.2.1 活性P-TEFb复合体的发现及结构 | 第21-23页 |
| 1.2.2 活性P-TEFb复合体在疾病中的功能 | 第23-24页 |
| 1.2.3 无活性P-TEFb的发现、结构及功能 | 第24-26页 |
| 1.2.4 细胞内调控P-TEFb活化的信号和分子机制 | 第26-27页 |
| 1.3 P-TEFb某些募集通道的发现 | 第27-31页 |
| 1.3.1 BRD4-P-TEFb的发现 | 第27-28页 |
| 1.3.2 BRD4及其家族广泛性研究 | 第28-29页 |
| 1.3.3 BRD4各结构域的功能 | 第29-30页 |
| 1.3.4 BRD4-P-TEFb的调控模式 | 第30-31页 |
| 1.4 SECs的组分、生物学功能及活性调控机制 | 第31-34页 |
| 1.4.1 超级延伸复合物(Super elongation complexs,SECs)的组成成分 | 第31-32页 |
| 1.4.2 超级延伸复合物(SECs)和人类疾病 | 第32-33页 |
| 1.4.3 超级延伸复合物(SECs)转录活性调控 | 第33-34页 |
| 1.5 NuclearSpeckle的发现、探索 | 第34-38页 |
| 1.5.1 Nuclear Speckle的发现 | 第34-35页 |
| 1.5.2 Nuclear Speckle的组成结构 | 第35-36页 |
| 1.5.3 Nuclear Speckle的动态变化和周期 | 第36-37页 |
| 1.5.4 Nuclear Speckle与P-TEFb所调控的转录延伸的关系 | 第37-38页 |
| 1.6 研究内容和意义 | 第38-40页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第38页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第38-40页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第40-58页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第40-43页 |
| 2.1.1 实验常用细胞株、菌株和质粒资源 | 第40-41页 |
| 2.1.2 实验常用试剂和材料 | 第41-42页 |
| 2.1.3 实验常用仪器和耗材 | 第42页 |
| 2.1.4 实验常用抗体 | 第42-43页 |
| 2.2 实验常用试剂配方 | 第43-48页 |
| 2.2.1 质粒DNA提取制备相关试剂 | 第43-44页 |
| 2.2.2 常用感受态制备试剂 | 第44页 |
| 2.2.3 细胞培养、转染及感染相关溶液 | 第44-45页 |
| 2.2.4 免疫荧光相关试剂 | 第45-46页 |
| 2.2.5 生化实验相关溶液 | 第46-47页 |
| 2.2.6 Western Blot相关溶液 | 第47-48页 |
| 2.3 实验方法 | 第48-58页 |
| 2.3.1 普通PCR克隆 | 第48页 |
| 2.3.2 琼脂糖胶/Glass Milk回收DNA | 第48-49页 |
| 2.3.3 基因片段的T4连接 | 第49页 |
| 2.3.4 感受态的制备 | 第49-50页 |
| 2.3.5 基因QuikChange实验 | 第50-51页 |
| 2.3.6 特异性shRNA的构建 | 第51-52页 |
| 2.3.7 质粒DNA小量提取(碱裂解法) | 第52页 |
| 2.3.8 质粒中量提取 | 第52-53页 |
| 2.3.9 细胞瞬时转染 | 第53-54页 |
| 2.3.10 病毒包装感染 | 第54页 |
| 2.3.11 细胞药物处理 | 第54页 |
| 2.3.12 核分级分离(Nucleic fractionation) | 第54-55页 |
| 2.3.13 免疫印记实验(Western blot) | 第55页 |
| 2.3.14 总RNA的提取 | 第55-56页 |
| 2.3.15 逆转录PCR(qRT-PCR) | 第56-58页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第58-79页 |
| 3.1 在应激条件下,观察活性P-TEFb相关蛋白质组分的分布 | 第58-61页 |
| 3.1.1 改良核抽提方法观察活性P-TEFb相关蛋白质组分的分布 | 第58-59页 |
| 3.1.2 免疫荧光实验观察活性P-TEFb相关蛋白质组分的分布 | 第59-61页 |
| 3.2 UV照射下,观察活性P-TEFb相关蛋白组分间相互作用的变化 | 第61-64页 |
| 3.2.1 UV照射下,生化实验观察活性P-TEFb相关蛋白组分间相互作用的变化 | 第61-62页 |
| 3.2.2 免疫荧光实验观察活性P-TEFb及相关蛋白组分的分布 | 第62-64页 |
| 3.3 CDK9定位于Speckle机制的研究 | 第64-69页 |
| 3.3.1 敲除实验探索CDK9定位于Speckle的机制 | 第64-67页 |
| 3.3.2 BRD4、AFF1和AFF4是CDK9定位于Speckle的关键蛋白因子 | 第67-69页 |
| 3.4 CyclinT定位于Speckle的机制研究 | 第69-74页 |
| 3.4.1 敲除实验探索CyclinT定位于Speckle的机制 | 第69-70页 |
| 3.4.2 ELL2是CyclinT定位于Speckle的关键因子 | 第70-71页 |
| 3.4.3 CDK9和CyclinT是被不同的蛋白因子分别募集到Speckle的 | 第71-74页 |
| 3.5 7SK snRNP复合物解离的同时P-TEFb组分也发生解离 | 第74-75页 |
| 3.6 总结与讨论 | 第75-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
