| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 英文缩写词表 | 第11-16页 |
| 1 引言 | 第16-26页 |
| 1.1 钩端螺旋体病与钩端螺旋体 | 第16-17页 |
| 1.2 病原体通过诱导宿主细胞凋亡获得持续感染能力 | 第17-18页 |
| 1.3 病原体外膜成分与宿主细胞凋亡有关 | 第18-19页 |
| 1.4 钩体的形态与外膜结构 | 第19-23页 |
| 1.5 论文研究内容及目的 | 第23-26页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第25页 |
| 1.5.2 研究目的 | 第25-26页 |
| 2 问号钩体赖株诱导内吞被抑制的巨噬细胞发生细胞凋亡的研究 | 第26-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-32页 |
| 2.1.1 主要仪器与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.2 菌株和细胞株来源及培养 | 第27-28页 |
| 2.1.3 5×EMJH培养基的配制 | 第28页 |
| 2.1.4 巨噬细胞内吞试验 | 第28-30页 |
| 2.1.5 透射电镜观察巨噬细胞对钩体的内吞作用 | 第30页 |
| 2.1.6 内吞抑制试验 | 第30-31页 |
| 2.1.7 问号钩体赖株诱导巨噬细胞凋亡的检测 | 第31-32页 |
| 2.1.8 统计学分析 | 第32页 |
| 2.2 实验结果 | 第32-35页 |
| 2.2.1 感染过程中巨噬细胞吞噬钩体的共聚焦显微成像结果 | 第32页 |
| 2.2.2 感染过程中巨噬细胞吞噬钩体的电镜分析结果 | 第32-33页 |
| 2.2.3 问号钩体赖株诱导巨噬细胞凋亡的流式细胞术结果与分析 | 第33-35页 |
| 2.3 小结 | 第35-36页 |
| 3 问号钩体赖株OMP和LPS诱导巨噬细胞凋亡的研究 | 第36-49页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-41页 |
| 3.1.1 主要仪器及试剂 | 第36-38页 |
| 3.1.2 问号钩体菌株与细胞株 | 第38页 |
| 3.1.3 TritonX114法提取问号钩体赖株外膜蛋白 | 第38-39页 |
| 3.1.4 Lep-OMP的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.5 酚-水法提取问号钩体赖株LPS | 第40-41页 |
| 3.1.6 鲎试验 | 第41页 |
| 3.1.7 a/dLep-OMP或Lep-LPS诱导巨噬细胞凋亡的检测 | 第41页 |
| 3.1.8 统计学分析 | 第41页 |
| 3.2 实验结果 | 第41-48页 |
| 3.2.1 a/dLep-OMP的Western Blot鉴定结果 | 第41-42页 |
| 3.2.2 Lep-LPS及a/dLep-OMP鲎试验检测结果 | 第42-43页 |
| 3.2.3 dLep-OMP和Lep-LPS诱导巨噬细胞凋亡情况 | 第43-48页 |
| 3.3 小结 | 第48-49页 |
| 4 问号钩体赖株FasL样外膜脂蛋白的鉴定及其诱导巨噬细胞凋亡作用的研究 | 第49-114页 |
| 4.1 材料与方法 | 第49-77页 |
| 4.1.1 主要仪器及试剂 | 第49-53页 |
| 4.1.2 钩体菌株、基因克隆与表达菌株及细胞株 | 第53-54页 |
| 4.1.3 dLep-OMP的制备 | 第54页 |
| 4.1.4 Lep-OMP中FasL样物质的钓取 | 第54页 |
| 4.1.5 SDS-PAGE制备 | 第54-55页 |
| 4.1.6 共沉淀产物的SDS-PAGE鉴定 | 第55-56页 |
| 4.1.7 共沉淀产物的鉴定 | 第56页 |
| 4.1.8 Fas结合蛋白Lep-OMP047的生物信息学分析 | 第56-57页 |
| 4.1.9 E.coli DH10B和BL21DE3感受态细胞的制备 | 第57页 |
| 4.1.10 致病性钩体和非致病性钩体LB047基因的检测 | 第57-62页 |
| 4.1.11 问号钩体赖株LB047基因的亚克隆 | 第62-63页 |
| 4.1.12 问号钩体赖株重组蛋白Lep-OMP047(rLep-OMP047)的表达与纯化 | 第63-69页 |
| 4.1.13 rLep-OMP047的抗血清制备与鉴定 | 第69-72页 |
| 4.1.14 Lep-OMP047蛋白在问号钩体赖株的膜定位检测 | 第72-73页 |
| 4.1.15 表面等离子体共振技术确认rLep-OMP047与Fas的相互作用 | 第73页 |
| 4.1.16 等温滴定量热法确认rLep-OMP047与Fas的相互作用 | 第73页 |
| 4.1.17 rLep-OMP047诱导巨噬细胞凋亡的检测 | 第73-74页 |
| 4.1.18 抗体封闭试验 | 第74页 |
| 4.1.19 rLep-OMP047蛋白诱导的巨噬细胞caspase-3/-8/-9活化情况检测 | 第74页 |
| 4.1.20 caspase抑制试验 | 第74-75页 |
| 4.1.21 问号钩体赖株感染巨噬细胞时LB047基因的表达检测 | 第75-77页 |
| 4.1.22 统计学分析 | 第77页 |
| 4.2 结果 | 第77-113页 |
| 4.2.1 Fas与dLep-OMP的共沉淀试验结果 | 第77-78页 |
| 4.2.2 NanoLC-LTQ MS/MS质谱分析结果 | 第78-79页 |
| 4.2.3 LB047基因产物(Lep-OMP047蛋白)的生物信息学分析 | 第79-81页 |
| 4.2.4 LB047基因在钩体不同基因种中的分布结果 | 第81-96页 |
| 4.2.5 问号钩体赖株LB047基因的克隆表达与纯化结果 | 第96-97页 |
| 4.2.6 rLep-OMP-IgG效价的测定结果 | 第97-98页 |
| 4.2.7 Lep-OMP047的钩体膜定位检测结果 | 第98-99页 |
| 4.2.8 rLep-OMP047与小鼠或人Fas结合能力的检测结果 | 第99-102页 |
| 4.2.9 rLep-OMP047诱导小鼠或人巨噬细胞凋亡的检测结果 | 第102-105页 |
| 4.2.10 rLep-OMP047活化巨噬细胞caspase的检测结果 | 第105-107页 |
| 4.2.11 抗体阻断后rLep-OMP047诱导小鼠或人巨噬细胞凋亡的检测结果 | 第107-110页 |
| 4.2.12 问号钩体赖株感染细胞过程中LB047基因表达水平的变化 | 第110-113页 |
| 4.3 小结 | 第113-114页 |
| 5 问号钩体赖株LPS通过TLR2-JNK/p38MAPK信号通路诱导巨噬细胞凋亡的研究 | 第114-137页 |
| 5.1 材料与方法 | 第114-122页 |
| 5.1.1 主要仪器与试剂 | 第114-116页 |
| 5.1.2 细胞株来源及培养 | 第116页 |
| 5.1.3 Lep-LPS诱导Fas/FasL表达的检测 | 第116-117页 |
| 5.1.4 Lep-LPS诱导Fas/FasL膜转位的检测 | 第117-118页 |
| 5.1.5 Lep-LPS诱导丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)活化的检测 | 第118页 |
| 5.1.6 Lep-LPS诱导c-Jun和ATF2核转位的检测 | 第118-120页 |
| 5.1.7 图像数据分析 | 第120页 |
| 5.1.8 p38MAPK或JNK抑制试验 | 第120页 |
| 5.1.9 Toll样受体(TLR)基因沉默及其鉴定 | 第120-121页 |
| 5.1.10 Lep-LPS通过TLR2介导的JNK/p38MAPK磷酸化测定 | 第121-122页 |
| 5.1.11 统计学分析 | 第122页 |
| 5.2 结果 | 第122-135页 |
| 5.2.1 Lep-LPS诱导巨噬细胞Fas/FasL mRNA水平的变化 | 第122-123页 |
| 5.2.2 Lep-LPS诱导巨噬细胞Fas/FasL蛋白表达的变化 | 第123-124页 |
| 5.2.3 Lep-LPS诱导巨噬细胞Fas/FasL细胞膜转位的变化 | 第124-126页 |
| 5.2.4 Lep-LPS诱导巨噬细胞JNK和p38MAPK活化水平的检测结果 | 第126-128页 |
| 5.2.5 Lep-LPS诱导巨噬细胞转录因子c-Jun和ATF2核转位情况的检测结果 | 第128-130页 |
| 5.2.6 Lep-LPS诱导JNK/p38MAPK被抑制巨噬细胞Fas/FasL表达的变化 | 第130-132页 |
| 5.2.7 Lep-LPS诱导JNK/p38MAPK被抑制巨噬细胞Fas/FasL膜转位水平变化 | 第132-134页 |
| 5.2.8 小鼠和人巨噬细胞TLR2和TLR4基因沉默效果 | 第134页 |
| 5.2.9 Lep-LPS诱导TLR2/4基因沉默巨噬细胞JNK/p38MAPK活化水平结果 | 第134-135页 |
| 5.3 小结 | 第135-137页 |
| 6 结果与讨论 | 第137-140页 |
| 参考文献 | 第140-151页 |
| 附录1: 主要溶液配制 | 第151-154页 |
| 附录2: 本研究所涉及13种钩体基因种LB047基因及其产物序列 | 第154-167页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第167-169页 |
