| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 引言 | 第9-12页 |
| 材料与方法 | 第12-25页 |
| 1. 实验材料 | 第12-15页 |
| 1.1 实验小鼠 | 第12页 |
| 1.2 细胞系与病原体 | 第12-13页 |
| 1.3 主要试剂和抗体 | 第13-14页 |
| 1.4 分子克隆 | 第14页 |
| 1.5 主要设备及软件 | 第14-15页 |
| 2. 实验方法 | 第15-25页 |
| 2.1 载体构建 | 第15-17页 |
| 2.2 小鼠原代腹腔巨噬细胞分离培养 | 第17页 |
| 2.3 小鼠骨髓来源的树突状细胞分离培养 | 第17页 |
| 2.4 RNA的抽提,反转录及荧光定量PCR(q-PCR) | 第17-18页 |
| 2.5 流式细胞分析 | 第18页 |
| 2.6 ELISA | 第18-19页 |
| 2.7 免疫印迹及免疫沉淀实验 | 第19-21页 |
| 2.8 体外蛋白纯化及GST pull down实验 | 第21-22页 |
| 2.9 免疫荧光 | 第22页 |
| 2.10 双荧光素酶报告基因检测 | 第22页 |
| 2.11 质谱兼容的硝酸银染色 | 第22-23页 |
| 2.12 RNF170 KO小鼠的制备及鉴定 | 第23-24页 |
| 2.13 细胞质粒转染 | 第24页 |
| 2.14 数据统计分析 | 第24-25页 |
| 实验结果 | 第25-52页 |
| 1. TLR3与RNF170两者存在相互作用 | 第25-29页 |
| 1.1 RNF170与TLR3相互作用 | 第25-26页 |
| 1.2 RNF170与TLR3直接相互作用 | 第26-27页 |
| 1.3 RNF170与TLR3在poly (I:C)刺激前后存在细胞内共定位 | 第27-29页 |
| 2. RNF170能够负向调控TLR3信号通路 | 第29-37页 |
| 2.1 在RAW264.7细胞中,RNF170负向调控TLR3信号通路 | 第29-31页 |
| 2.2 在树突状细胞和腹腔巨噬细胞中,RNF170负向调控TLR3信号通路 | 第31-37页 |
| 3. Rnf170缺失小鼠更易发生poly (I:C)诱导的炎症性死亡 | 第37-39页 |
| 4. RNF170对TLR3信号通路的抑制作用依赖于其E3泛素连接酶活性 | 第39-45页 |
| 4.1 RNF170的RING和TM结构域能够与TLR3的TIR结构域相结合 | 第39-40页 |
| 4.2 RNF170能够介导TLR3的TIR结构域发生泛素化修饰 | 第40-42页 |
| 4.3 RNF170对TLR3的泛素化修饰依赖于其E3泛素连接酶活性 | 第42-45页 |
| 5. RNF170能够介导TLR3发生K48位多聚泛素化修饰 | 第45-48页 |
| 5.1 RNF170蛋白与TLR3蛋白表达量呈负相关性 | 第45-46页 |
| 5.2 放线菌酮(CHX)实验进一步验证了RNF170能够降低TLR3的蛋白水平 | 第46-47页 |
| 5.3 RNF170介导TLR3发生K48位连接的多聚泛素化修饰 | 第47-48页 |
| 6. RNF170对TLR3K766泛素化修饰负向调控TLR3介导的天然免疫反应 | 第48-52页 |
| 6.1 RNF170不能介导TLR3的K766R突变体发生泛素化修饰 | 第48-50页 |
| 6.2 RNF170失去对TLR3K766R突变体下游信号通路的抑制作用 | 第50-52页 |
| 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 缩略词表 | 第58-60页 |
| 文献综述 | 第60-66页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
