| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 1 序言 | 第13-23页 |
| 1.1 藻胆体 | 第13-15页 |
| 1.2 藻胆蛋白 | 第15-20页 |
| 1.2.1 脱辅基蛋白 | 第16-18页 |
| 1.2.2 藻胆色素 | 第18-19页 |
| 1.2.3 脱辅基蛋白与藻胆色素的结合 | 第19-20页 |
| 1.3 荧光共振能量转移 | 第20-21页 |
| 1.4 课题研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 2 CpcS裂合酶催化别藻蓝蛋白B中α和β亚基光谱特性研究 | 第23-41页 |
| 2.1 序言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.1 主要材料 | 第23-24页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第24-26页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.3.1 同源比对及结构模拟 | 第26-27页 |
| 2.3.2 大量感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.3.3 pET-apcD4、pET-apcB3质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2.3.4 PCR扩增目的片段 | 第28-29页 |
| 2.3.5 PCR产物的回收 | 第29-30页 |
| 2.3.6 回收产物磷酸化与连接 | 第30页 |
| 2.3.7 质粒转化BL21感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.3.8 转化子筛选 | 第31页 |
| 2.3.9 各蛋白重组PCB表达体系的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.10 重组蛋白的表达 | 第32页 |
| 2.3.11 重组蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.12 重组蛋白光谱的测定 | 第33页 |
| 2.3.13 蛋白质制样和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第34-40页 |
| 2.4.1 同源比对结果 | 第34-35页 |
| 2.4.2 ApcD4结构模拟结果 | 第35-36页 |
| 2.4.3 不同酶的催化活性比较 | 第36-37页 |
| 2.4.4 重组蛋白吸收荧光光谱结果与分析 | 第37-38页 |
| 2.4.5 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第38页 |
| 2.4.6 构建突变体的琼脂糖凝胶电泳结果与分析 | 第38-39页 |
| 2.4.7 ApcD4及突变体的荧光光谱结果与分析 | 第39-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-41页 |
| 3 ApcB3、ApcD4替代集胞藻6803中藻胆蛋白ApcB，ApcD | 第41-55页 |
| 3.1 序言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料 | 第41-43页 |
| 3.2.1 主要材料 | 第41-42页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-52页 |
| 3.3.1 蓝藻的纯化 | 第43-44页 |
| 3.3.2 蓝藻总DNA的提取 | 第44页 |
| 3.3.3 pBlue-apcD4_(His6)-Kan和p Blue-apcB3-Str的分子克隆 | 第44-50页 |
| 3.3.4 质粒自然转化集胞藻PCC6803及突变体的筛选 | 第50-51页 |
| 3.3.5 ApcD4与ApcB3的复合体蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 3.4 结果与分析 | 第52-54页 |
| 3.4.1 突变体构建示意图 | 第52-53页 |
| 3.4.2 转化子琼脂糖凝胶电泳图 | 第53-54页 |
| 3.4.3 提纯光谱结果与分析 | 第54页 |
| 3.5 讨论 | 第54-55页 |
| 4 BDFP1.2/1.3/1.2:1.2 融合mCherry比较FRET效果 | 第55-64页 |
| 4.1 序言 | 第55-56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 主要材料 | 第56-57页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第57页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-60页 |
| 4.3.1 PCR扩增目的片段 | 第57页 |
| 4.3.2 载体的酶切 | 第57页 |
| 4.3.3 载体与片段重组 | 第57页 |
| 4.3.4 重组产物转化BL21感受态细胞 | 第57-58页 |
| 4.3.5 转化子筛选 | 第58页 |
| 4.3.6 各融合蛋白重组BV表达体系的构建 | 第58-59页 |
| 4.3.7 重组蛋白的表达 | 第59页 |
| 4.3.8 重组蛋白的纯化与光谱测定 | 第59-60页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第60-63页 |
| 4.4.1 重组蛋白荧光光谱结果与分析 | 第60-61页 |
| 4.4.2 BDFPs、HO1融合蛋白荧光光谱结果与分析 | 第61-62页 |
| 4.4.3 BDFPs、mCherry、HO1融合蛋白荧光光谱结果与分析 | 第62-63页 |
| 4.5 讨论 | 第63-64页 |
| 5 外源蛋白在高等植物中的瞬时和稳态表达及生理特性研究 | 第64-79页 |
| 5.1 序言 | 第64页 |
| 5.2 实验材料 | 第64-67页 |
| 5.2.1 主要材料 | 第64-65页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第65-67页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第67页 |
| 5.3 实验方法 | 第67-73页 |
| 5.3.1 瞬态载体的构建 | 第67-69页 |
| 5.3.2 稳态载体的构建 | 第69页 |
| 5.3.3 农杆菌感受态细胞的制备 | 第69-70页 |
| 5.3.4 冻融法转化农杆菌 | 第70页 |
| 5.3.5 转化农杆菌检测 | 第70页 |
| 5.3.6 注射烟草 | 第70-71页 |
| 5.3.7 叶盘法转烟草核基因 | 第71页 |
| 5.3.8 生根条件的探索 | 第71-72页 |
| 5.3.9 室温叶绿素荧光的测定 | 第72页 |
| 5.3.10 快速光响应曲线 | 第72-73页 |
| 5.3.11 原生质体的提取 | 第73页 |
| 5.3.12 低温荧光光谱测定 | 第73页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第73-78页 |
| 5.4.1 转化农杆菌检测 | 第73-74页 |
| 5.4.2 生根条件 | 第74-75页 |
| 5.4.3 叶绿素荧光测定 | 第75-76页 |
| 5.4.4 快速光响应曲线 | 第76-77页 |
| 5.4.5 低温荧光测量结果 | 第77-78页 |
| 5.5 讨论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-92页 |
| 附录1 攻读学位期间发表的学术论文 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
