| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.1 鲤春病毒血症研究进展 | 第11页 |
| 1.2 鲤春病毒血症病毒 | 第11-13页 |
| 1.2.1 病毒分子结构 | 第11-12页 |
| 1.2.2 病毒的宿主范围 | 第12页 |
| 1.2.3 鲤春病毒血症病毒的检测方法 | 第12页 |
| 1.2.4 病毒逃避宿主先天免疫反应策略 | 第12-13页 |
| 1.3 宿主的天然免疫应答 | 第13页 |
| 1.4 Viperin | 第13-15页 |
| 1.4.1 Viperin的结构与特征 | 第13-14页 |
| 1.4.2 Viperin的表达调控 | 第14页 |
| 1.4.3 Viperin在抗病毒反应中的作用 | 第14-15页 |
| 1.4.4 Viperin对天然免疫信号的调控 | 第15页 |
| 1.5 选择性剪接(alternativesplicing,AS) | 第15-16页 |
| 1.5.1 选择性剪接的类型 | 第15页 |
| 1.5.2 选择性剪接的基本机制 | 第15-16页 |
| 1.5.3 基因的选择性剪接在水生动物中的研究 | 第16页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 毒株、菌株、细胞系及BALB/c小鼠 | 第18页 |
| 2.1.2 质粒及试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 引物序列 | 第18-20页 |
| 2.1.4 主要实验仪器及设备 | 第20页 |
| 2.1.5 分子生物学分析软件 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 主要试剂及培养基的配制 | 第20-21页 |
| 2.2.2 表达质粒的构建 | 第21页 |
| 2.2.3 重组蛋白诱导表达及纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.4 动物免疫 | 第22页 |
| 2.2.5 间接ELISA | 第22页 |
| 2.2.6 脾细胞的制备 | 第22页 |
| 2.2.7 细胞融合 | 第22-23页 |
| 2.2.8 亚克隆筛选阳性杂交瘤细胞 | 第23页 |
| 2.2.9 染色体的制备 | 第23页 |
| 2.2.10 单克隆抗体制备 | 第23页 |
| 2.2.11 抗体纯化步骤 | 第23-24页 |
| 2.2.12 RNA提取 | 第24页 |
| 2.2.13 银染 | 第24-25页 |
| 2.2.14 间接免疫荧光实验 | 第25页 |
| 2.2.15 WesternBlot | 第25-26页 |
| 2.2.16 荧光定量PCR分析 | 第26页 |
| 2.2.17 病毒紫外灭活及滴度测定 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-41页 |
| 3.1 SVCV-N原核表达及单克隆抗体制备 | 第27-32页 |
| 3.1.1 SVCV-N基因的PCR扩增 | 第27页 |
| 3.1.2 重组表达载体SVCV-N-KG的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 3.1.3 SVCV-N-KG融合蛋白的可溶性分析 | 第28页 |
| 3.1.4 免疫后小鼠血清效价测定 | 第28-29页 |
| 3.1.5 杂交瘤细胞的染色体制备 | 第29页 |
| 3.1.6 单克隆抗体效价测定 | 第29-30页 |
| 3.1.7 单克隆抗体的间接免疫荧光(IFA)分析 | 第30-31页 |
| 3.1.8 单克隆抗体的westernblot分析 | 第31-32页 |
| 3.1.9 单克隆抗体的抗原表位分析 | 第32页 |
| 3.2 Viperin及其剪接异构体抗SVCV的机制研究 | 第32-41页 |
| 3.2.1 SVCV感染的鱼类细胞中Viperin基因存在选择性剪接现象 | 第32-34页 |
| 3.2.2 SVCV可诱导Viperin及Viperin_sv1的产生 | 第34-35页 |
| 3.2.3 Viperin及Viperin_sv1真核表达及亚细胞定位 | 第35-36页 |
| 3.2.4 Viperin及其剪接异构体Viperin_sv1对SVCV复制的影响 | 第36-38页 |
| 3.2.5 Viperin_sv1可以诱导IFN及ISG分子mRNA的表达 | 第38-39页 |
| 3.2.6 Viperin_sv1可以诱导IRF3/IRF7的激活 | 第39页 |
| 3.2.7 SVCV可以调控Viperin_sv1的泛素蛋白酶途径降解 | 第39-41页 |
| 4 讨论与结论 | 第41-44页 |
| 4.1 SVCV-N原核表达及单克隆抗体制备 | 第41页 |
| 4.2 Viperin及其剪接异构体抗SVCV的机制研究 | 第41-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
