| 摘要 | 第7-9页 |
| abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 寨卡病毒的流行病学 | 第13-15页 |
| 1.1 寨卡病毒的流行特征 | 第13页 |
| 1.2 寨卡病毒的传播 | 第13-15页 |
| 1.2.1 ZIKV传播区域 | 第13-15页 |
| 1.2.2 ZIKV传播路线 | 第15页 |
| 2 寨卡病毒的分子生物学特性 | 第15-19页 |
| 2.1 病毒基因组谱系 | 第15-16页 |
| 2.2 病毒基因组结构与复制 | 第16-17页 |
| 2.2.1 基因组结构 | 第16页 |
| 2.2.2 基因组复制 | 第16-17页 |
| 2.3 病毒基因组编码蛋白的功能 | 第17-18页 |
| 2.4 病毒的感染与致病机制 | 第18-19页 |
| 3 寨卡的临床表现 | 第19-20页 |
| 4 寨卡的诊断 | 第20-21页 |
| 5 寨卡病毒疫苗研究现状 | 第21-22页 |
| 6 寨卡病毒的防控 | 第22-23页 |
| 7 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 寨卡病毒NS5蛋白单克隆抗体的制备 | 第24-52页 |
| 1 材料与方法 | 第24-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第24-28页 |
| 1.1.1 质粒、菌株、病毒、细胞系和实验动物 | 第24页 |
| 1.1.2 主要实验试剂和仪器 | 第24-25页 |
| 1.1.3 培养基及其配制 | 第25-26页 |
| 1.1.4 主要缓冲液及其配制 | 第26-28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-40页 |
| 1.2.1 病毒扩增 | 第28页 |
| 1.2.2 NS5基因引物的设计 | 第28页 |
| 1.2.3 病毒总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 1.2.4 ZIKV NS5基因的扩增 | 第29-30页 |
| 1.2.5 DNA片段的回收 | 第30页 |
| 1.2.6 限制性内切酶反应 | 第30页 |
| 1.2.7 连接反应 | 第30-31页 |
| 1.2.8 产物的转化 | 第31页 |
| 1.2.9 重组质粒的提取 | 第31-32页 |
| 1.2.10 重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| 1.2.11 pET-28a-ZIKV-NS5诱导表达条件摸索 | 第33页 |
| 1.2.12 表达产物pET-28a-ZIKV-NS5的SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| 1.2.13 表达产物pET-28a-ZIKV-NS5的Western Blot分析 | 第33页 |
| 1.2.14 pET-28a-ZIKV-NS5蛋白的包涵体纯化及定量 | 第33-34页 |
| 1.2.15 动物免疫 | 第34-35页 |
| 1.2.16 间接ELISA检测方法的建立 | 第35-36页 |
| 1.2.17 间接ELISA法检测小鼠的免疫效价 | 第36页 |
| 1.2.18 SP2/0骨髓瘤细胞的准备 | 第36页 |
| 1.2.19 免疫脾细胞的制备 | 第36-37页 |
| 1.2.20 饲养细胞的制备 | 第37页 |
| 1.2.21 细胞融合 | 第37页 |
| 1.2.22 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第37页 |
| 1.2.23 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第37-38页 |
| 1.2.24 杂交瘤细胞的染色体计数 | 第38页 |
| 1.2.25 单克隆抗体的大量制备 | 第38-39页 |
| 1.2.26 单克隆抗体效价的检测 | 第39页 |
| 1.2.27 单克隆抗体的IFA分析 | 第39页 |
| 1.2.28 单克隆抗体的Western Blot分析 | 第39页 |
| 1.2.29 单克隆抗体靶抗原表位的初步鉴定 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-51页 |
| 2.1 ZIKV NS5基因片段PCR扩增及克隆质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| 2.1.1 扩增ZIKV NS5基因片段 | 第40页 |
| 2.1.2 pET-28a-ZIKV-NS5的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2 pET-28a-ZIKV-NS5原核蛋白的表达及纯化 | 第41-43页 |
| 2.3 pET-28a-ZIKV-NS5蛋白最佳抗原包被浓度的测定 | 第43-44页 |
| 2.4 小鼠免疫效价的检测 | 第44-45页 |
| 2.5 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第45页 |
| 2.6 杂交瘤细胞遗传稳定性的分析 | 第45-46页 |
| 2.7 单克隆抗体的大量制备 | 第46-47页 |
| 2.8 单克隆抗体效价的检测 | 第47页 |
| 2.9 单克隆抗体IFA检测 | 第47-49页 |
| 2.10 单克隆抗体的Western Blot分析 | 第49-50页 |
| 2.11 单克隆抗体抗原表位的初步验证的Western Blot分析 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 第三章 寨卡病毒NS1蛋白在杆状病毒中表达研究 | 第52-76页 |
| 1 材料与方法 | 第52-66页 |
| 1.1 实验材料 | 第52-54页 |
| 1.1.1 质粒、菌株、病毒、细胞系和实验动物 | 第52页 |
| 1.1.2 主要药品、试剂和仪器 | 第52-53页 |
| 1.1.3 主要培养基及其配制 | 第53页 |
| 1.1.4 主要缓冲液(溶液)及其配制 | 第53-54页 |
| 1.2 实验方法 | 第54-66页 |
| 1.2.1 ZIKV NS1杆粒的构建 | 第54-62页 |
| 1.2.2 昆虫细胞的转染 | 第62-63页 |
| 1.2.3 病毒贮液的制备及扩增 | 第63页 |
| 1.2.4 重组杆状病毒的毒价测定 | 第63-64页 |
| 1.2.5 重组杆状病毒表达的初步验证 | 第64页 |
| 1.2.6 重组蛋白ZIKV-F-NS1最优表达条件的摸索 | 第64-65页 |
| 1.2.7 可溶性NS1蛋白的大量表达及纯化 | 第65页 |
| 1.2.8 重组蛋白的免疫原性分析 | 第65-66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-75页 |
| 2.1 ZIKV NS1基因片段扩增与杆状病毒重组质粒的鉴定 | 第66-68页 |
| 2.1.1 扩增ZIKV NS1基因片段 | 第66-67页 |
| 2.1.2 pFastBacI-ZIKV-F-NS1/pFastBac1-ZIKV-NS1的酶切鉴定 | 第67-68页 |
| 2.2 重组穿梭质粒Bacmid的构建与鉴定 | 第68-69页 |
| 2.3 重组杆状病毒蛋白表达的初步验证 | 第69-71页 |
| 2.3.1 间接免疫荧光检测 | 第69-70页 |
| 2.3.2 Western Blot分析 | 第70-71页 |
| 2.4 重组杆状病毒rBacmid-ZIKV-F-NS1的获得 | 第71页 |
| 2.5 重组杆状病毒毒价的测定 | 第71页 |
| 2.6 重组杆状病毒蛋白的最优表达条件摸索 | 第71-72页 |
| 2.7 重组蛋白在High5细胞中的大量表达及纯化 | 第72-73页 |
| 2.8 rBacmid-ZIKV-F-NS1蛋白最佳抗原包被浓度的测定 | 第73-74页 |
| 2.9 血清特异性抗体效价检测 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
