| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第11-28页 |
| 1.1 细胞穿膜肽 | 第11-16页 |
| 1.1.1 细胞穿膜肽 | 第11页 |
| 1.1.2 细胞穿膜肽的特点及分类 | 第11-12页 |
| 1.1.3 人源性穿膜肽HBD | 第12-13页 |
| 1.1.4 细胞穿膜肽的跨膜机制 | 第13-16页 |
| 1.1.5 穿膜肽的应用前景 | 第16页 |
| 1.2 凋亡蛋白 | 第16-23页 |
| 1.2.1 CAV(鸡贫血病毒) | 第16-17页 |
| 1.2.2 凋亡蛋白-序列及结构 | 第17-18页 |
| 1.2.3 凋亡蛋白诱导肿瘤细胞凋亡 | 第18页 |
| 1.2.4 凋亡蛋白的作用机制 | 第18-22页 |
| 1.2.5 凋亡蛋白的临床前景 | 第22-23页 |
| 1.3 肿瘤靶向治疗 | 第23-26页 |
| 1.3.1 EGFR作为肿瘤靶点 | 第23-25页 |
| 1.3.2 痘苗病毒生长因子VGF | 第25-26页 |
| 1.4 课题的研究背景及意义 | 第26-28页 |
| 第2章 材料与方法 | 第28-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-34页 |
| 2.1.1 菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 生化试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 大肠杆菌培养基 | 第29页 |
| 2.1.4 细胞实验 | 第29-31页 |
| 2.1.5 常用缓冲液配制 | 第31-33页 |
| 2.1.6 动物实验 | 第33页 |
| 2.1.7 仪器与设备 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第34-35页 |
| 2.2.2 融合蛋白表达与纯化 | 第35页 |
| 2.2.3 细胞实验 | 第35-37页 |
| 2.2.4 ELISA分析融合蛋白与EGFR的结合能力 | 第37-38页 |
| 2.2.5 Western Blot检测胞内蛋白表达量 | 第38-39页 |
| 2.2.6 动物实验 | 第39-40页 |
| 第3章 人源性穿膜肽HBD穿膜性质研究 | 第40-48页 |
| 3.1 HBD荧光标记蛋白的制备 | 第40-41页 |
| 3.2 HBD穿膜细胞谱研究 | 第41页 |
| 3.3 携载的药物蛋白分子量对HBD穿膜效率的影响 | 第41-43页 |
| 3.4 HBD胞内定位观察 | 第43-45页 |
| 3.5 HBD穿膜途径研究 | 第45-48页 |
| 第4章 靶向药物Apoptin-VGF16-HBD的性质研究 | 第48-63页 |
| 4.1 靶向性融合蛋白Apoptin-VGF16-HBD的构建与表达纯化 | 第48-51页 |
| 4.1.1 Apoptin-VGF16-HBD-pET28a的构建 | 第48-49页 |
| 4.1.2 Apoptin-VGF16-HBD-pET28a融合蛋白的表达 | 第49-50页 |
| 4.1.3 Apoptin-VGF16-HBD-pET28a融合蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 4.2 Apoptin、Apoptin-HBD、EGFP-VGF16-HBD融合蛋白的制备 | 第51-53页 |
| 4.3 Apoptin重组蛋白对体外细胞抑制活性分析——MTT实验 | 第53-54页 |
| 4.4 Apoptin重组蛋白的凋亡活性分析 | 第54-56页 |
| 4.4.1 核形态观察凋亡效果 | 第54-55页 |
| 4.4.2 流式细胞术检测凋亡效果 | 第55-56页 |
| 4.5 融合蛋白的胞内定位 | 第56-57页 |
| 4.6 Apoptin-VGF16-HBD融合蛋白与EGFR的结合能力分析 | 第57-59页 |
| 4.7 动物成瘤模型检测融合蛋白的体内抑瘤效果 | 第59-61页 |
| 4.8 融合蛋白相关的凋亡途径分析 | 第61-63页 |
| 第5章 结论与展望 | 第63-67页 |
| 5.1 结论 | 第63-65页 |
| 5.1.1 HBD穿膜性质研究 | 第63页 |
| 5.1.2 靶向性融合蛋白Apoptin-VGF-HBD的构建与表达纯化 | 第63-64页 |
| 5.1.3 重组蛋白对体外细胞抑制活性分析——MTT实验 | 第64页 |
| 5.1.4 重组蛋白的凋亡活性分析 | 第64页 |
| 5.1.5 融合蛋白的胞内定位 | 第64页 |
| 5.1.6 ELISA分析融合蛋白与EGFR的结合能力 | 第64页 |
| 5.1.7 动物成瘤模型检测融合蛋白的体内抑瘤效果 | 第64-65页 |
| 5.1.8 融合蛋白有关凋亡途径的分析 | 第65页 |
| 5.2 展望 | 第65-67页 |
| 5.2.1 敏感细胞株的筛选 | 第65页 |
| 5.2.2 低剂量、长时间的作用效果 | 第65页 |
| 5.2.3 其他靶点的探究 | 第65页 |
| 5.2.4 凋亡机制的进一步研究 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 研究生期间发表论文 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
