| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第14-23页 |
| 1.1 单核细胞增生李斯特菌简介 | 第14页 |
| 1.2 单核细胞增生李斯特菌的致病机制 | 第14-16页 |
| 1.2.1 单核细胞增生李斯特菌在宿主细胞内的侵染机制 | 第14-15页 |
| 1.2.2 单核细胞增生李斯特菌的主要毒力因子 | 第15-16页 |
| 1.3 单核细胞增生李斯特菌生物被膜简介 | 第16-18页 |
| 1.3.1 生物被膜简介 | 第16-17页 |
| 1.3.2 生物被膜的形成过程 | 第17-18页 |
| 1.3.3 影响生物被膜形成的因素 | 第18页 |
| 1.4 细菌胞外蛋白研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5 蛋白质组学研究进展 | 第19-21页 |
| 1.5.1 蛋白质组学简介 | 第19-20页 |
| 1.5.2 蛋白质组学的技术 | 第20页 |
| 1.5.3 iTRAQ技术在病原微生物研究中的应用 | 第20-21页 |
| 1.6 谷氨酸脱氢酶在细菌中的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 单核细胞增生李斯特菌中GDH缺失对细菌生理功能的影响 | 第23-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 主要培养基配制 | 第23-25页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-26页 |
| 2.3.1 菌株生长曲线的测定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 细菌形态大小的观察 | 第26页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第26-28页 |
| 2.4.1 GDH缺失对细菌生长的影响 | 第26-28页 |
| 2.4.2 GDH对细菌形态的影响 | 第28页 |
| 2.5 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 单核细胞增生李斯特菌中GDH缺失对细菌的自溶能力与生物被膜形成能力的影响 | 第30-37页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 菌株 | 第30页 |
| 3.1.2 培养基的配置 | 第30页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第30-31页 |
| 3.1.4 主要试验仪器 | 第31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 微孔板法检测生物被膜 | 第31-32页 |
| 3.2.2 细菌自溶曲线测定方法 | 第32-33页 |
| 3.3 实验结果 | 第33-35页 |
| 3.3.1 微孔板法检测BHI培养基中生物被膜形成能力: | 第33-34页 |
| 3.3.2 单核细胞增生李斯特菌的诱导自溶曲线 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 单核细胞增生李斯特菌GDH缺失对细菌毒力的影响 | 第37-46页 |
| 4.1 实验材料 | 第37-39页 |
| 4.1.1 菌株 | 第37页 |
| 4.1.2 培养基的配制 | 第37-38页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第38页 |
| 4.1.4 主要实验仪器 | 第38-39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 4.2.1 细菌溶血活性实验 | 第39页 |
| 4.2.2 细菌对棉铃虫幼虫的侵染实验 | 第39-40页 |
| 4.2.3 RT-qPCR检测主要的毒力基因hly和prfA的转录表达 | 第40-41页 |
| 4.3 实验结果 | 第41-45页 |
| 4.3.1 细菌溶血活性实验结果 | 第41-42页 |
| 4.3.2 GDH缺失对棉铃虫幼虫毒性的影响 | 第42-43页 |
| 4.3.3 棉铃虫肠道病理切片的观察 | 第43页 |
| 4.3.4 RT-qPCR检测GDH缺失对毒力基因hly和prfA转录表达的影响 | 第43-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 基于iTRAQ技术探究谷氨酸脱氢酶缺失对单核细胞增生李斯特菌胞外蛋白的影响 | 第46-55页 |
| 5.1 实验材料与实验方法 | 第46-47页 |
| 5.1.1 菌株 | 第46页 |
| 5.1.2 培养基 | 第46页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第46-47页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第47页 |
| 5.2 iTR AQ蛋白质组学分析实验过程 | 第47-49页 |
| 5.2.1 蛋白样品制备 | 第47页 |
| 5.2.2 胰蛋白酶消化 | 第47页 |
| 5.2.3 iTRAQ标记 | 第47-48页 |
| 5.2.4 强阳离子交换液相色谱分级(SCX) | 第48页 |
| 5.2.5 AB Sciex 6600进行LC-MS/MS分析 | 第48页 |
| 5.2.6 数据库搜索 | 第48页 |
| 5.2.7 数据分析 | 第48-49页 |
| 5.3 实验结果 | 第49-53页 |
| 5.3.2 差异蛋白筛选 | 第49页 |
| 5.3.3 COG聚类分析 | 第49-53页 |
| 5.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第六章 GDH蛋白的原核表达与纯化 | 第55-65页 |
| 6.1 实验材料与实验方法 | 第55-59页 |
| 6.1.1 菌株与质粒 | 第55页 |
| 6.1.2 培养基 | 第55页 |
| 6.1.3 试剂与公司 | 第55-56页 |
| 6.1.4 实验所需溶液的配置 | 第56页 |
| 6.1.5 蛋白质凝胶电泳系列溶液 | 第56-57页 |
| 6.1.6 SDS-PAGE凝胶配置 | 第57页 |
| 6.1.7 蛋白纯化所需试剂配置 | 第57-59页 |
| 6.1.8 主要仪器 | 第59页 |
| 6.1.9 实验所需引物 | 第59页 |
| 6.2 实验方法 | 第59-62页 |
| 6.2.1 单核细胞增生李斯特菌基因组的提取 | 第59页 |
| 6.2.2 扩增目的基因 | 第59-60页 |
| 6.2.3 构建pET28a-gdhA表达载体 | 第60-61页 |
| 6.2.4 GDH蛋白的表达与纯化 | 第61-62页 |
| 6.3. 实验结果 | 第62-64页 |
| 6.3.1 重组质粒pET28a-gdhA的构建 | 第62页 |
| 6.3.2 重组质粒的构建 | 第62-63页 |
| 6.3.3 GDH蛋白的诱导表达结果 | 第63-64页 |
| 6.4 讨论 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间发表的毕业论文 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
