| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第1章 绪论 | 第16-29页 |
| 1.1 碱性果胶酶概述 | 第16-19页 |
| 1.1.1 碱性果胶酶的来源 | 第16页 |
| 1.1.2 碱性果胶酶的应用 | 第16-17页 |
| 1.1.3 碱性果胶酶异源表达研究现状 | 第17-19页 |
| 1.2 在酵母中通过N-糖基化改造增强酶的活性、热稳定性和分泌效率的最新进展 | 第19-29页 |
| 1.2.1 酵母表达系统研究现状 | 第19-20页 |
| 1.2.2 酵母中的N-糖基化 | 第20-21页 |
| 1.2.3 N-糖基化改造对酵母中表达重组酶活力的影响及可行的改造策略 | 第21-24页 |
| 1.2.4 N-糖基化改造对酵母中表达重组酶热稳定性的影响及可行的改造策略 | 第24-26页 |
| 1.2.5 N-糖基化改造对酵母中表达重组酶分泌效率的影响及可行的改造策略 | 第26-29页 |
| 第2章 半理性设计转换传统去N-糖基化方式 | 第29-46页 |
| 2.1 引言 | 第29-30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-32页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第30页 |
| 2.2.2 培养基 | 第30页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.3.1 DNA操作 | 第32-33页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态细胞制备与转化 | 第33-34页 |
| 2.3.3 巴斯德毕赤酵母感受态细胞制备与电转化 | 第34-35页 |
| 2.3.4 碱性果胶酶的模板确定与最佳突变确定 | 第35-36页 |
| 2.3.5 重组表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.6 重组菌的摇瓶发酵 | 第37页 |
| 2.3.7 碱性果胶酶的提取与纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.8 碱性果胶酶的活性检测 | 第38页 |
| 2.3.9 碱性果胶酶的蛋白浓度检测 | 第38-39页 |
| 2.3.10 碱性果胶酶的比酶活检测 | 第39页 |
| 2.3.11 碱性果胶酶的动力学参数检测 | 第39页 |
| 2.3.12 碱性果胶酶的热稳定性检测 | 第39页 |
| 2.3.13 SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第40-45页 |
| 2.4.1 确定最佳去N-糖基化方式 | 第40-41页 |
| 2.4.2 定点突变 | 第41-42页 |
| 2.4.3 突变酶的诱导表达与酶活检测 | 第42-43页 |
| 2.4.4 突变酶的催化性质检测 | 第43页 |
| 2.4.5 突变酶的热稳定性检测 | 第43-45页 |
| 2.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 第3章 在酶的反向转角区引入增强芳香族序列 | 第46-59页 |
| 3.1 引言 | 第46-47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-49页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第47页 |
| 3.2.2 培养基 | 第47页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第47-48页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第48-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-51页 |
| 3.3.1 DNA操作 | 第49页 |
| 3.3.2 新N-糖基化位点的设计 | 第49-50页 |
| 3.3.3 单点突变与组合突变 | 第50-51页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第51-58页 |
| 3.4.1 确定新N-糖基化位点 | 第51-53页 |
| 3.4.2 单点突变与组合突变 | 第53-54页 |
| 3.4.3 突变酶的诱导表达与酶活检测 | 第54-56页 |
| 3.4.4 突变酶的催化性质检测 | 第56-57页 |
| 3.4.5 突变酶的热稳定性检测 | 第57-58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第4章 突变酶的酶学性质 | 第59-68页 |
| 4.1 引言 | 第59-60页 |
| 4.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第60页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第60-61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-63页 |
| 4.3.1 碱性果胶酶的最适反应温度检测 | 第61页 |
| 4.3.2 碱性果胶酶的最适反应pH检测 | 第61页 |
| 4.3.3 碱性果胶酶的温度稳定性 | 第61页 |
| 4.3.4 碱性果胶酶的pH稳定性 | 第61-63页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第63-67页 |
| 4.4.1 突变酶的最适反应温度 | 第63页 |
| 4.4.2 碱性果胶酶的最适反应pH检测 | 第63-64页 |
| 4.4.3 碱性果胶酶的温度稳定性 | 第64-65页 |
| 4.4.4 突变酶的pH稳定性(在25℃和55℃下) | 第65-67页 |
| 4.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第5章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 5.1 结论 | 第68-69页 |
| 5.2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 研究生在读期间发表的论文情况 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
