| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语 | 第8-11页 |
| 1 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 萝芙木简介 | 第11-18页 |
| 1.1.1 萝芙木资源分布及其生理研究 | 第11-12页 |
| 1.1.2 萝芙木中所含生物碱及其药理作用 | 第12-16页 |
| 1.1.3 云南萝芙木简介 | 第16页 |
| 1.1.4 萝芙木的研究现状 | 第16-18页 |
| 1.2 阿吗灵代谢及其合成关键酶PNAE | 第18-22页 |
| 1.2.1 萝芙木中的生物碱合成 | 第18-20页 |
| 1.2.2 萝芙木中重要药用生物碱阿吗灵 | 第20-21页 |
| 1.2.3 PNAE基因的研究 | 第21-22页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 1.4 技术路线图 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.1 云南萝芙木组织培养 | 第25-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 试验方法 | 第25-26页 |
| 2.2 PNAE基因克隆 | 第26-31页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.2.2 药品与试剂 | 第26页 |
| 2.2.3 载体与菌株 | 第26-27页 |
| 2.2.4 软件与仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.5 配制溶液 | 第28-29页 |
| 2.2.6 叶片中总RNA提取与检测 | 第29页 |
| 2.2.7 PCR扩增引物的设计 | 第29页 |
| 2.2.8 云南萝芙木PNAE基因的克隆 | 第29-31页 |
| 2.3 荧光定量PCR分析PNAE基因的表达 | 第31-32页 |
| 2.3.1 云南萝芙木不同组织总RNA提取 | 第31页 |
| 2.3.2 设计荧光定量PCR引物与内参 | 第31-32页 |
| 2.3.3 荧光定量PCR | 第32页 |
| 2.4 PNAE基因原核表达 | 第32-37页 |
| 2.4.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.4.2 实验载体与菌株 | 第32-33页 |
| 2.4.3 制备感受态细胞 | 第33页 |
| 2.4.4 PNAE基因的原核表达 | 第33-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-55页 |
| 3.1 云南萝芙木组织培养 | 第37页 |
| 3.2 PNAE基因的克隆 | 第37-42页 |
| 3.2.1 总RNA电泳检测 | 第37-38页 |
| 3.2.2 PNAE基因PCR扩增及其检测 | 第38-39页 |
| 3.2.3 TA克隆载体转化克隆菌株DH5α | 第39页 |
| 3.2.4 PNAE蛋白酶生物信息学分析 | 第39-42页 |
| 3.3 PNAE基因表达的荧光定量分析 | 第42-50页 |
| 3.3.1 PNAE不同组织总RNA提取结果 | 第42-43页 |
| 3.3.2 PNAE荧光定量PCR重复性实验结果及分析 | 第43-50页 |
| 3.4 PNAE基因的原核表达 | 第50-55页 |
| 3.4.1 重组质粒提取与酶切结果检测 | 第50-51页 |
| 3.4.2 重组质粒PNAE/表达载体转化BL21及阳性结果鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4.3 诱导表达结果分析 | 第52-55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 4.1 结论 | 第55-56页 |
| 5 讨论与创新 | 第56-58页 |
| 5.1 讨论 | 第56-57页 |
| 5.2 存在问题 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |