| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语索引 | 第17-18页 |
| 实验仪器及设备 | 第18-20页 |
| 实验试剂 | 第20-23页 |
| 第一章 绪论 | 第23-30页 |
| 1.1 研究牙齿发育的意义 | 第23页 |
| 1.2 牙齿和牙本质发育的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.3 SLPI与牙本质发育的关系 | 第25-28页 |
| 1.4 MDPC-23细胞系 | 第28-29页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第29页 |
| 1.6 本课题的研究路线 | 第29-30页 |
| 第二章 鼠源SLPI基因过表达和沉默载体的构建 | 第30-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-32页 |
| 2.1.1 载体和菌株 | 第30页 |
| 2.1.2 主要试剂配制 | 第30-32页 |
| 2.2 实验方法与步骤 | 第32-44页 |
| 2.2.1 鼠源SLPI基因过表达载体的构建 | 第32-40页 |
| 2.2.1.1 引物设计 | 第32-34页 |
| 2.2.1.2 pLVX-IRES-ZsGreen1质粒和pRP.ExBi-CMV-SLPI-IRES-eGFP质粒的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.1.3 目的片段的获得 | 第35-36页 |
| 2.2.1.4 线性化载体的获得 | 第36-37页 |
| 2.2.1.5 胶回收SLPI片段和酶切pLVX-IRES-ZsGreen1载体.. | 第37-38页 |
| 2.2.1.6 目的片段与载体的重组 | 第38-39页 |
| 2.2.1.7 转化 | 第39页 |
| 2.2.1.8 菌落PCR验证及测序保菌 | 第39-40页 |
| 2.2.2 鼠源SLPI基因沉默载体的构建 | 第40-44页 |
| 2.2.2.1 鼠源SLPI的shRNA设计 | 第41-42页 |
| 2.2.2.2 shRNA引物的退火连接 | 第42页 |
| 2.2.2.3 pLVX-shRNA2空载质粒的提取 | 第42页 |
| 2.2.2.4 线性化载体的获得 | 第42-43页 |
| 2.2.2.5 胶回收pLVX-shRNA2线性化载体 | 第43页 |
| 2.2.2.6 目的片段与载体的连接 | 第43-44页 |
| 2.2.2.7 转化 | 第44页 |
| 2.2.2.8 菌落PCR验证及测序保菌 | 第44页 |
| 2.3 实验结果及讨论 | 第44-49页 |
| 2.3.1 鼠源SLPI目的基因PCR结果 | 第44-45页 |
| 2.3.2 pLVX-IRES-ZsGreen1空载质粒的双酶切结果 | 第45-46页 |
| 2.3.3 重组质粒pLVX-SLPI-IRES-ZsGreen1的测序结果 | 第46-47页 |
| 2.3.4 pLVX-shRNA2空载质粒的双酶切结果 | 第47-48页 |
| 2.3.5 重组质粒pLVX-SLPI-shRNA2的测序结果 | 第48-49页 |
| 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 鼠源SLPI基因过表达和沉默稳转细胞系的构建 | 第50-68页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-52页 |
| 3.1.1 细胞 | 第50页 |
| 3.1.2 主要试剂配制 | 第50-52页 |
| 3.2 实验方法与步骤 | 第52-61页 |
| 3.2.1 鼠源SLPI基因过表达稳转MDPC-23细胞株构建 | 第52-57页 |
| 3.2.1.1 包装细胞293T的准备 | 第52页 |
| 3.2.1.2 pLVX-SLPI-IRES-ZsGreen1质粒和pLVX-IRES-ZsGreen1空载质粒去内毒素质粒提取 | 第52-53页 |
| 3.2.1.3 转染 | 第53-54页 |
| 3.2.1.4 慢病毒收集 | 第54页 |
| 3.2.1.5 慢病毒浓缩 | 第54-55页 |
| 3.2.1.6 慢病毒感染MDPC-23细胞 | 第55-56页 |
| 3.2.1.7 稳定细胞株筛选 | 第56-57页 |
| 3.2.2 鼠源SLPI基因沉默稳转MDPC-23细胞株构建 | 第57页 |
| 3.2.3 鼠源SLPI基因过表达及沉默稳转MDPC-23细胞株的鉴定 | 第57-61页 |
| 3.2.3.1 各实验组细胞株的培养 | 第57页 |
| 3.2.3.2 各实验组细胞株总RNA的提取 | 第57-58页 |
| 3.2.3.3 逆转录反应 | 第58-60页 |
| 3.2.3.4 PCR反应 | 第60-61页 |
| 3.3 实验结果及讨论 | 第61-66页 |
| 3.3.1 各细胞株中荧光表达情况 | 第61-65页 |
| 3.3.1.1 空载MDPC-23细胞荧光表达结果 | 第61-62页 |
| 3.3.1.2 鼠源SLPI基因过表达稳转MDPC-23细胞株构建结果 | 第62-63页 |
| 3.3.1.3 鼠源SLPI基因沉默稳转MDPC-23细胞株构建结果 | 第63-65页 |
| 3.3.2 各细胞株中SLPImRNA表达情况 | 第65-66页 |
| 3.3.2.1 MDPC-23细胞提取总RNA结果 | 第65-66页 |
| 3.3.2.2 SLPImRNA表达结果 | 第66页 |
| 本章小结 | 第66-68页 |
| 第四章 SLPI在成牙本质细胞分化矿化中的作用 | 第68-84页 |
| 4.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 4.1.1 细胞 | 第68页 |
| 4.1.2 主要试剂配制 | 第68-69页 |
| 4.2 实验方法与步骤 | 第69-74页 |
| 4.2.1 茜素红染色 | 第69-70页 |
| 4.2.1.1 各实验组细胞的准备 | 第69页 |
| 4.2.1.2 茜素红染色 | 第69-70页 |
| 4.2.2 RT-PCR检测目的基因的mRNA表达量 | 第70-73页 |
| 4.2.2.1 各实验组细胞的准备 | 第70页 |
| 4.2.2.2 RT-PCR引物设计 | 第70-71页 |
| 4.2.2.3 各实验组细胞株总RNA的提取 | 第71页 |
| 4.2.2.4 逆转录反应 | 第71页 |
| 4.2.2.5 PCR反应 | 第71-73页 |
| 4.2.3 基底膜对MDPC-23细胞分化矿化的影响 | 第73-74页 |
| 4.2.3.1 基底膜包被 | 第73页 |
| 4.2.3.2 茜素红染色 | 第73页 |
| 4.2.3.3 RT-PCR检测目的基因的mRNA表达量 | 第73-74页 |
| 4.3 实验结果及讨论 | 第74-83页 |
| 4.3.1 MDPC-23细胞矿化结果 | 第74-76页 |
| 4.3.2 目的基因mRNA表达结果 | 第76-78页 |
| 4.3.3 基底膜MDPC-23细胞矿化结果 | 第78-80页 |
| 4.3.4 钙化块形成情况对比 | 第80-81页 |
| 4.3.5 基底膜目的基因mRNA表达结果 | 第81-83页 |
| 本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 敲除SLPI基因对小鼠牙齿发育影响研究 | 第84-104页 |
| 5.1 实验材料 | 第84-85页 |
| 5.1.1 小鼠模型 | 第84页 |
| 5.1.2 主要试剂配制 | 第84-85页 |
| 5.2 实验方法与步骤 | 第85-93页 |
| 5.2.1 小鼠基因型鉴定 | 第85-88页 |
| 5.2.1.1 鼠尾样品DNA提取 | 第85-86页 |
| 5.2.1.2 小鼠基因型检测 | 第86-88页 |
| 5.2.2 蜡块及切片的制备 | 第88-90页 |
| 5.2.2.1 包埋前组织处理 | 第88-89页 |
| 5.2.2.2 包埋 | 第89-90页 |
| 5.2.2.3 切片 | 第90页 |
| 5.2.3 小鼠牙齿的Masson三色染色及免疫组化实验 | 第90-93页 |
| 5.2.3.1 小鼠牙齿Masson三色染色方法 | 第90-91页 |
| 5.2.3.2 小鼠牙齿免疫组化染色方法 | 第91-93页 |
| 5.3 实验结果及讨论 | 第93-103页 |
| 5.3.1 小鼠基因型鉴定结果 | 第93-94页 |
| 5.3.2 免疫组化和马森三色染色结果 | 第94-103页 |
| 本章小结 | 第103-104页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-112页 |
| 附录A 攻读学位其间发表论文目录 | 第112-113页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第113页 |
