| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 耳聋概述和研究现状 | 第15-17页 |
| 1.1.1 耳聋的简介 | 第15页 |
| 1.1.2 耳聋的遗传方式和分类 | 第15-16页 |
| 1.1.3 致聋基因的研究现状 | 第16-17页 |
| 1.2 MYO7A基因 | 第17-18页 |
| 1.3 MYO15A基因 | 第18-20页 |
| 1.4 新一代测序技术 | 第20-21页 |
| 1.4.1 新一代测序技术简介 | 第20-21页 |
| 1.4.2 新一代测序技术的应用 | 第21页 |
| 1.5 耳聋致病基因的研究方法 | 第21-22页 |
| 1.6 课题的立题依据、目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 云南地区耳聋人群MYO7A和MYO15A基因变异和突变谱分析初探 | 第23-63页 |
| 2.1 引言 | 第23-27页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第27-30页 |
| 2.2.1 研究对象 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 样本收集过程中遵循的原则 | 第27页 |
| 2.2.1.2 研究对象的选取标准和排除标准 | 第27-28页 |
| 2.2.1.3 选取的对象 | 第28页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 核酸提取试剂盒(磁珠法) | 第29页 |
| 2.2.3.2 目标区域捕获试剂盒 | 第29-30页 |
| 2.3 研究方法 | 第30-37页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取 | 第30-33页 |
| 2.3.1.1 磁珠法提取基因组DNA的原理 | 第30-31页 |
| 2.3.1.2 使用前准备 | 第31页 |
| 2.3.1.3 操作步骤 | 第31-32页 |
| 2.3.1.4 注意事项 | 第32-33页 |
| 2.3.2 基因组DNA样品检测 | 第33页 |
| 2.3.3 目标区域捕获测序实验流程 | 第33-37页 |
| 2.3.3.1 芯片探针的设计 | 第33-34页 |
| 2.3.3.2 序列捕获实验流程 | 第34-37页 |
| 2.3.3.3 库检 | 第37页 |
| 2.3.3.4 上机测序 | 第37页 |
| 2.4 生物信息学分析 | 第37-40页 |
| 2.4.1 测序数据质量评估 | 第38-39页 |
| 2.4.1.1 测序数据过滤 | 第38-39页 |
| 2.4.1.2 测序数据质量 | 第39页 |
| 2.4.1.3 测序深度、覆盖度 | 第39页 |
| 2.4.2 变异信息的处理 | 第39-40页 |
| 2.5 实验结果 | 第40-59页 |
| 2.5.1 患者基本信息 | 第40页 |
| 2.5.2 测序质量检测结果 | 第40-41页 |
| 2.5.2.1 测序数据质量 | 第40页 |
| 2.5.2.2 覆盖度和比对率结果 | 第40-41页 |
| 2.5.3 MYO7A基因变异位点频谱绘制和分析 | 第41-50页 |
| 2.5.4 MYO15A基因变异位点的统计和分析 | 第50-59页 |
| 2.6 讨论 | 第59-61页 |
| 2.7 本章小结 | 第61-63页 |
| 第三章 云南汉族1个耳聋家系MYO7A基因新突变的鉴定分析 | 第63-81页 |
| 3.1 引言 | 第63-64页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第64-67页 |
| 3.2.1 研究对象 | 第64-65页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第65页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第65-67页 |
| 3.2.3.1 动物基因组DNA提取试剂盒 | 第65-66页 |
| 3.2.3.2 PCR试剂盒 | 第66页 |
| 3.2.3.3 琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第66-67页 |
| 3.3 研究方法 | 第67-72页 |
| 3.3.1 实验技术路线 | 第67页 |
| 3.3.2 基因组DNA的提取 | 第67-69页 |
| 3.3.2.1 试剂的准备 | 第67页 |
| 3.3.2.2 全血DNA基因组的提取步骤 | 第67-68页 |
| 3.3.2.3 注意事项 | 第68-69页 |
| 3.3.2.4 DNA浓度和纯度的鉴定 | 第69页 |
| 3.3.3 高通量测序 | 第69页 |
| 3.3.4 Sanger测序 | 第69-70页 |
| 3.3.4.1 引物的设计及其序列 | 第69-70页 |
| 3.3.4.2 PCR反应体系 | 第70页 |
| 3.3.4.3 PCR反应条件 | 第70页 |
| 3.3.5 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 | 第70-72页 |
| 3.3.5.1 制胶 | 第70-71页 |
| 3.3.5.2 上样 | 第71页 |
| 3.3.5.3 电泳 | 第71页 |
| 3.3.5.4 注意事项 | 第71-72页 |
| 3.4 实验结果 | 第72-78页 |
| 3.4.1 患者基本信息 | 第72页 |
| 3.4.2 患者DNA样本检测结果 | 第72-73页 |
| 3.4.3 耳聋基因检测结果 | 第73-75页 |
| 3.4.3.1 高通量测序结果 | 第73-74页 |
| 3.4.3.2 Sanger测序结果 | 第74-75页 |
| 3.4.4 位点致病性分析 | 第75-76页 |
| 3.4.5 保守性分析 | 第76-77页 |
| 3.4.6 蛋白模型 | 第77-78页 |
| 3.5 讨论 | 第78-79页 |
| 3.6 本章小结 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 附录 | 第89-92页 |
| 附录A：攻读学位期间发表论文 | 第89-90页 |
| 附录B：攻读学位期间参与科研项目 | 第90-91页 |
| 附录C：耳聋调查问卷 | 第91-92页 |
| 附录D：患者ABR检测结果 | 第92页 |