| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 综述 | 第11-21页 |
| 1.1 性别决定的方式 | 第11-16页 |
| 1.1.1 性别决定的关键基因 | 第11-12页 |
| 1.1.2 性染色体决定型 | 第12页 |
| 1.1.3 染色体数目决定型 | 第12-13页 |
| 1.1.4 线粒体双单亲遗传 | 第13-14页 |
| 1.1.5 环境决定型 | 第14-16页 |
| 1.2 启动子 | 第16-17页 |
| 1.2.1 启动子的分类 | 第16-17页 |
| 1.2.2 启动子功能的作用机理 | 第17页 |
| 1.3 贝类性别现象 | 第17-18页 |
| 1.4 贝类性别基因 | 第18-19页 |
| 1.4.1 贝类性别相关基因的研究进展 | 第18页 |
| 1.4.2 性别相关基因Sox9和Dmrt1的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 第2章 池蝶蚌Sox9基因cDNA的全序列克隆与分析 | 第21-36页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 组织RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 中间片段的确定 | 第23-25页 |
| 2.2.3 获得全长 | 第25-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-34页 |
| 2.3.1 RNA检测结果 | 第27页 |
| 2.3.2 Hs-Sox9基因cDNA全长克隆结果 | 第27-30页 |
| 2.3.3 池蝶蚌Hs-Sox9氨基酸序列系统进化树 | 第30页 |
| 2.3.4 池蝶蚌Hs-Sox9蛋白质一级结构预测 | 第30-31页 |
| 2.3.5 池蝶蚌Hs-Sox9蛋白质理化性质预测 | 第31-32页 |
| 2.3.6 池蝶蚌Hs-Sox9蛋白质定位预测 | 第32-33页 |
| 2.3.7 池蝶蚌Hs-Sox9蛋白质二级结构预测 | 第33-34页 |
| 2.3.8 池蝶蚌Hs-Sox9蛋白质三级结构预测 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第3章 Hs-Sox9在不同组织、不同月龄以及环境因子胁迫下的表达分析 | 第36-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 3.2.1 提取RNA | 第37页 |
| 3.2.2 反转录 | 第37-38页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR | 第38页 |
| 3.3 结果 | 第38-42页 |
| 3.3.1 Hs-Sox9基因在雌雄池蝶蚌各组织的表达 | 第38-40页 |
| 3.3.2 Hs-Sox9基因在不同年龄池蝶蚌性腺的表达 | 第40页 |
| 3.3.3 不同浓度雌性激素对Hs-Sox9基因和Hs-Dmrt1基因表达的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.4 不同温度对Hs-Sox9基因和Hs-Dmrt1基因表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-45页 |
| 第4章 Hs-Sox9基因启动子的克隆及分析 | 第45-54页 |
| 4.1 材料 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-50页 |
| 4.2.1 提取基因组DNA | 第46-47页 |
| 4.2.2 基因组DNA质量的检测 | 第47页 |
| 4.2.3 酶切基因组DNA建库 | 第47页 |
| 4.2.4 纯化DNA文库 | 第47-48页 |
| 4.2.5 在基因组DNA上添加GenomeWalkerAdapt | 第48页 |
| 4.2.6 染色体步移设计引物 | 第48页 |
| 4.2.7 染色体步移PCR反应 | 第48-49页 |
| 4.2.8 目的条带验证 | 第49-50页 |
| 4.3 结果 | 第50-53页 |
| 4.3.1 池蝶蚌Hs-Sox9和Hs-Dmrt1启动子序列的克隆 | 第50-51页 |
| 4.3.2 池蝶蚌Hs-Sox9和Hs-Dmrt1启动子序列的分析 | 第51-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-54页 |
| 第5章 池蝶蚌Hs-Sox9和Hs-Dmrt1蛋白的原核表达及凝胶阻滞分析 | 第54-63页 |
| 5.1 材料 | 第55页 |
| 5.2 方法 | 第55-60页 |
| 5.2.1 设计引物 | 第55页 |
| 5.2.2 ORF框的验证、检测、PCR产物切胶回收纯化 | 第55页 |
| 5.2.3 提取质粒 | 第55-56页 |
| 5.2.4 酶切及酶连 | 第56页 |
| 5.2.5 重组质粒的鉴定 | 第56页 |
| 5.2.6 小量诱导表达 | 第56-57页 |
| 5.2.7 大量诱导表达 | 第57-58页 |
| 5.2.8 蛋白纯化 | 第58页 |
| 5.2.9 蛋白透析 | 第58页 |
| 5.2.10 蛋白浓缩 | 第58-59页 |
| 5.2.11 蛋白浓度测定 | 第59页 |
| 5.2.12 凝胶阻滞 | 第59-60页 |
| 5.3 结果 | 第60-62页 |
| 5.3.1 蛋白表达及纯化结果 | 第60-61页 |
| 5.3.2 蛋白浓度测定 | 第61页 |
| 5.3.3 凝胶阻滞(亲和性分析)结果 | 第61-62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-63页 |
| 第6章 结论与展望 | 第63-64页 |
| 6.1 结论 | 第63页 |
| 6.2 展望 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 1、本研究所用仪器设备及试剂 | 第70-71页 |
| 2、实验所用引物表 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第72页 |
