| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 综述 鸡白痢检测技术的研究进展 | 第13-23页 |
| 1 鸡白痢对养鸡场的危害及流行情况 | 第13-14页 |
| 2 鸡白痢病的诊断方法 | 第14页 |
| 3 传统分离鉴定鸡白痢沙门菌的方法 | 第14-15页 |
| 4 PCR技术检测鸡白痢沙门菌 | 第15-16页 |
| 5 免疫磁珠法检测鸡白痢 | 第16-17页 |
| 6 免疫胶体金技术检测鸡白痢 | 第17-18页 |
| 7 ELISA方法检测鸡白痢 | 第18-19页 |
| 参考文献 | 第19-23页 |
| 第一章 鸡白痢沙门菌ipaJ基因的克隆及表达 | 第23-42页 |
| 1 研究材料、试剂及仪器 | 第23-24页 |
| 1.1 质粒及菌种 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-31页 |
| 2.1 鸡白痢沙门菌及福氏志贺菌ipaJ基因的克隆 | 第24-26页 |
| 2.1.1 引物的设计 | 第24-25页 |
| 2.1.2 鸡白痢沙门菌C79-13及福氏志贺菌SNI基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.1.2.1 细菌的培养 | 第25页 |
| 2.1.2.2 细菌DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.1.3 ipaJ基因的扩增 | 第26页 |
| 2.1.3.1 高保真酶PCR扩增条件 | 第26页 |
| 2.2 表达载体的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3 原核表达菌的构建 | 第27页 |
| 2.4 表达重组菌的诱导表达及表达产物的纯化 | 第27-30页 |
| 2.4.1 重组菌BL21(DE3)-pColdI-SP-ipaJ的诱导表达及产物纯化 | 第28页 |
| 2.4.2 重组菌ER2523-pMAL-c5X-SP-ipaJ的诱导表达及产物纯化 | 第28-29页 |
| 2.4.3 重组菌ER2523-pMAL-c5X-SF-ipaJ的诱导表达及产物纯化 | 第29-30页 |
| 2.5 重组菌诱导表达产物的鉴定及SDS-PAGE和Western Blot分析 | 第30-31页 |
| 2.5.1 重组菌BL21(DE3)-pColdI-SP-ipaJ、ER2523-pMAL-c5X-SP-ipaJ和ER2523-pMAL-c5X-SF-ipaJ诱导表达产物的鉴定及分析 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-38页 |
| 3.1 目的基因的扩增和原核表达质粒的鉴定 | 第31-33页 |
| 3.1.1 鸡白痢沙门菌ipaJ基因的扩增 | 第31页 |
| 3.1.2 福氏志贺菌ipaJ基因的扩增 | 第31-32页 |
| 3.1.3 重组质粒pColdI-SP-ipaJ和pMAL-c5X-SP-ipaJ的鉴定 | 第32页 |
| 3.1.4 重组质粒pMAL-c5X-SF-ipaJ的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2 重组菌的诱导表达及纯化产物的SDS-PAGE与Western Blot分析 | 第33-38页 |
| 3.2.1 重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE分析 | 第33-35页 |
| 3.2.2 重组菌诱导表达纯化产物的SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| 3.2.3 重组表达蛋白的Western Blot鉴定 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-42页 |
| 第二章 鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的制备 | 第42-59页 |
| 1 材料与试剂 | 第42-43页 |
| 1.1 生物材料 | 第42页 |
| 1.2 生物试剂 | 第42-43页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第43页 |
| 1.4 实验动物 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-51页 |
| 2.1 动物的免疫 | 第43-44页 |
| 2.2 配制试剂 | 第44页 |
| 2.3 细胞融合 | 第44-46页 |
| 2.3.1 饲养细胞的制备 | 第44页 |
| 2.3.2 SP2/0-Ag-14细胞的制备 | 第44-45页 |
| 2.3.3 脾脏细胞的制备 | 第45页 |
| 2.3.4 细胞融合 | 第45-46页 |
| 2.3.5 融合细胞的铺板与培养 | 第46页 |
| 2.4 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第46-47页 |
| 2.4.1 间接ELISA检测方法的建立 | 第46-47页 |
| 2.4.2 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第47页 |
| 2.5 阳性杂交瘤细胞的亚克隆化 | 第47-48页 |
| 2.6 阳性杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第48页 |
| 2.7 单克隆抗体腹水的制备 | 第48-49页 |
| 2.8 鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的鉴定 | 第49-51页 |
| 2.8.1 抗体腹水和细胞上清效价的测定 | 第49页 |
| 2.8.2 单克隆抗体的亚类鉴定 | 第49-50页 |
| 2.8.3 单克隆抗体特异性的鉴定 | 第50页 |
| 2.8.4 Western Blot鉴定单克隆抗体 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-55页 |
| 3.1 间接ELISA检测方法的建立 | 第51页 |
| 3.2 阳性杂交瘤细胞株的建立 | 第51页 |
| 3.3 单克隆抗体亚类、细胞培养上清及腹水效价的测定 | 第51-52页 |
| 3.4 单克隆抗体特异性鉴定结果 | 第52页 |
| 3.5 单克隆抗体的Western Blot鉴定 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 参考文献 | 第58-59页 |
| 第三章 鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的初步应用 | 第59-72页 |
| 1 材料与试剂 | 第60-61页 |
| 1.1 生物材料 | 第60页 |
| 1.2 生物试剂 | 第60页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第60页 |
| 1.4 实验动物 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-65页 |
| 2.1 动物的免疫及血清的采集 | 第61页 |
| 2.2 鸡白痢沙门菌IpaJ抗体的体内动态变化规律 | 第61-62页 |
| 2.2.1 间接ELISA检测方法的建立 | 第61-62页 |
| 2.2.2 体内IpaJ抗体的动态变化规律 | 第62页 |
| 2.3 鸡白痢沙门菌IpaJ蛋白的体外表达 | 第62-63页 |
| 2.4 鸡白痢沙门菌IpaJ蛋白的分泌表达鉴定 | 第63页 |
| 2.5 竞争ELISA检测方法的建立 | 第63-65页 |
| 2.5.1 单克隆抗体的选择 | 第63页 |
| 2.5.2 方阵实验确定抗原包被浓度和抗体工作浓度 | 第63-64页 |
| 2.5.3 血清最佳工作浓度的确定 | 第64页 |
| 2.5.4 绘制ROC曲线及确定Cut-off值 | 第64-65页 |
| 2.5.5 竞争ELISA的初步应用 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-70页 |
| 3.1 间接ELISA检测方法的建立 | 第65-66页 |
| 3.2 体内IpaJ抗体的动态变化规律测定 | 第66页 |
| 3.3 鸡白痢沙门菌IpaJ蛋白的检测 | 第66-67页 |
| 3.4 鸡白痢沙门菌IpaJ蛋白的分泌表达鉴定 | 第67-68页 |
| 3.5 竞争ELISA检测方法的建立 | 第68-69页 |
| 3.5.1 方阵实验确定抗原包被浓度和抗体工作浓度 | 第68页 |
| 3.5.2 血清最佳工作浓度的确定 | 第68-69页 |
| 3.5.3 绘制ROC曲线及确定Cut-off值 | 第69页 |
| 3.6 竞争ELISA的初步应用 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-72页 |
| 攻读硕士研究生期间发表文章 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
